新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响论文

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1、新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响论文和钢乐东海杨山冬张顺李克强【摘要】目的：观察新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响。方法：以48例具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者为研究对象，采用RTPCR技术，联合检测外周血中CK19mRNA、VEGFmRNA和hMAMmRNA的表达，观察新辅助化疗前后血微转移因子变化。结果：本组乳腺癌微转移因子阳性率在病理分级中差异无显著性意义(P0.05);在分期中，分期越高阳性率越高(P0.05);化疗方案可影响微转移因子阳性率的变化(P0.01)。结论：通过检

2、测乳腺癌患者外周血中微转移因子，有可能成为判断乳腺癌预后和指导治疗的指标。【关键词】乳腺癌新辅助化疗微转移因子逆转录聚合酶链反应NeoadjuvantChemotherapyforPeripheralBloodMicrometastasisFactorsinPatientsofBreastCancerHEGang,etal.NingboNo.2Hospital,Ningbo(315010),ChinaAbstractObjective:Toexploretheinfluenceofneoadjuvan

3、tchemotherapyonperipheralmicrometastasisfactorsinbreastcancer.Methods:CK19mRNA,VEGFmRNAandhMAMmRNAinperipheralbloodof48breastcancerpatientsotherapy.Results:Nosignificantdifferenceinthebreastmicrometastasisfactorsicrometastasisfactorsotherapyhadpositive

4、effectonmicrometastasisfactors(P0.01).Conclusion:Thefactorsofperipheralmicrometastasiscouldbetestedforbreastcancerpatients,guidingprognosisandtreatment.Keyotherapymicrometastasisfactorreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)肿瘤对化疗药物的敏感性一直是近年研究

5、的热点。NSABPB18试验随访5年的资料证实1，检测外周血微转移肿瘤细胞，并选择有效药物进行治疗.freelg,第1天，氟尿嘧啶500mg,第1天，多柔比星60mg,第1天，两周方案;第1天采用AT方案行新辅助化疗25例，予紫杉醇160mg，第1天，表柔比星60mg，第1天，两周方案。分别于新辅助化疗前第1天和化疗结束后第7天检测外周血中相关基因标志物微转移因子的表达水平。48例患者之前均未行任何治疗。2.2检测方法化疗前和化疗后分别取外周静脉血10ml，弃去采血针抽取的前2ml血，以减少标本被皮

6、肤细胞污染可能，随后取8ml分别加入四支含EDTA的抗凝管中，充分摇匀，以PBS稀释后，采用淋巴细胞分离液离心，收集淋巴细胞和单核细胞层，洗涤后移至EP管，70℃冻存备提取RNA用。2.2.1仪器、试剂与引物PersonalCycler型PCR仪(德国Biometra公司);GelDoc型凝胶成像分析系统(美国Biorad公司);RNA提取试剂盒和RTPCR试剂盒(Takara公司);引物(上海英骏生物技术有限公司)。VEGFC上游引物：5’GCATGAACACCAGCACGAG3’;下游引物

7、：5’ATGAAGGGACACAACGACAC3’，扩增产物为717bp片段。CKl9上游引物：5’GCGACTACAGCCACTACTACAC3’;下游引物：5’GAACCAGGCTTCAGCATCC3’，扩增产物为440bp片段。11MAM上游引物：5’CCGACAGCAGCAGCCTCAC3’;下游引物：5’TCCGTAGTTGGTTTCTCAC3’，扩增产物为338bp片段。内参照βactin上游引物：5’AGAAGGATTCCTATGTGGGCG3’;下游引物：5’

8、AAGCATTTGCGGTGGACG3’，扩增产物为979bp片段。2.2.2RNA提取及鉴定取出保存的单核细胞标本，按RNA提取试剂盒中的操作说明书提取总RNA，并根据(A260A320)×稀释倍数×0.04μg/μl值计算RNA的浓度，以A260/A280判定其纯度。2.2.3RTPCR反应按照RTPCR试剂盒操作，βactin分别与VEGF、CK19和hMAM进行同管扩增，PCR产物用1%琼脂糖电泳后，进行凝胶成像分析，并根据VEGF