新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响

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1、新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响作者：和钢乐东海杨山冬张顺李克强【摘要】目的：观察新辅助化疗对乳腺癌外周血微转移因子的影响。方法：以48例具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者为研究对象，采用RTPCR技术，联合检测外周血中CK19mRNA、VEGFmRNA和hMAMmRNA的表达，观察新辅助化疗前后血微转移因子变化。结果：本组乳腺癌微转移因子阳性率在病理分级中差异无显著性意义(P>0.05);在分期中，分期越高阳性率越高(P<0.05);化疗方案可影响微转移因子阳性率的变化(P<0.01)。结论：通过检测乳腺癌患者外周血中微转移因子，有可能成为判断乳腺癌预后和指导治疗的

2、指标。【关键词】乳腺癌新辅助化疗微转移因子逆转录聚合酶链反应NeoadjuvantChemotherapyforPeripheralBloodMicrometastasisFactorsinPatientsofBreastCancerHEGang,etal.NingboNo.2Hospital,Ningbo(315010),China　　AbstractObjective:Toexploretheinfluenceofneoadjuvantchemotherapyonperipheralmicrometastasisfactorsinbreastcancer.Methods:CK19mRNA

3、,VEGFmRNAandhMAMmRNAinperipheralbloodof48breastcancerpatientsotherapy.Results:Nosignificantdifferenceinthebreastmicrometastasisfactorsicrometastasisfactorsotherapyhadpositiveeffectonmicrometastasisfactors(P<0.01).Conclusion:Thefactorsofperipheralmicrometastasiscouldbetestedforbreastcancerpatients

4、,guidingprognosisandtreatment.　　Keyotherapymicrometastasisfactorreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)　　肿瘤对化疗药物的敏感性一直是近年研究的热点。NSABPB18试验随访5年的资料证实[1]，检测外周血微转移肿瘤细胞，并选择有效药物进行治疗，是新辅助化疗亟待解决的问题。笔者选择细胞角蛋白19(CK19)、血管内皮生长因子(VEGF)和人乳腺球蛋白(hMAM)作为乳腺癌外周血微转移因子进行联合检测研究，探讨新辅助化疗对微小转移灶检测的方法和临床意义。　　1临床

5、资料　　选择2006年4月～2009年3月具备新辅助化疗条件的乳腺癌患者48例，年龄35～78岁，平均47.6岁。病理分期：I～II期17例，III期31例;病理分级：浸润性低分化腺癌27例，浸润性中、高分化腺癌21例。　　2方法　　2.1新辅助化疗方法48例采用CAF方案行新辅助化疗23例，予环磷酰胺600mg,第1天，氟尿嘧啶500mg,第1天，多柔比星60mg,第1天，两周方案;第1天采用AT方案行新辅助化疗25例，予紫杉醇160mg，第1天，表柔比星60mg，第1天，两周方案。分别于新辅助化疗前第1天和化疗结束后第7天检测外周血中相关基因标志物微转移因子的表达水平。48例患者之前均未行

6、任何治疗。　　2.2检测方法化疗前和化疗后分别取外周静脉血10ml，弃去采血针抽取的前2ml血，以减少标本被皮肤细胞污染可能，随后取8ml分别加入四支含EDTA的抗凝管中，充分摇匀，以PBS稀释后，采用淋巴细胞分离液离心，收集淋巴细胞和单核细胞层，洗涤后移至EP管，70℃冻存备提取RNA用。　　2.2.1仪器、试剂与引物PersonalCycler型PCR仪(德国Biometra公司);GelDoc型凝胶成像分析系统(美国Biorad公司);RNA提取试剂盒和RTPCR试剂盒(Takara公司);引物(上海英骏生物技术有限公司)。VEGFC上游引物：5’GCATGAACACCAGCACG

7、AG3’;下游引物：5’ATGAAGGGACACAACGACAC3’，扩增产物为717bp片段。CKl9上游引物：5’GCGACTACAGCCACTACTACAC3’;下游引物：5’GAACCAGGCTTCAGCATCC3’，扩增产物为440bp片段。11MAM上游引物：5’CCGACAGCAGCAGCCTCAC3’;下游引物：5’TCCGTAGTTGGTTTCTCAC3’，