微波提取百合总黄酮及抗氧化性研究

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1、微波提取百合总黄酮及抗氧化性研究【摘要】目的在微波条件下寻找提取百合总黄酮的优化条件。方法对百合中黄酮类化合物的微波提取及其抗氧化性进行研究。提取采用正交实验法，抗氧化性研究采用培养箱储藏法。结果百合总黄酮类化合物的最佳提取工艺条件为乙醇体积分数80%，提取时间4min，固液比1g∶20ml，微波功率620P200B电子天平(上海精密仪器仪表有限公司);离心机(LC10-24A，北京医用离心机厂)。化学试剂均为分析纯，北京化工厂生产。　　2方法　　2.1百合总黄酮含量的测定方法　　2.1.1标准曲线的制作精确称取120℃干燥恒重的芦丁510mg，用60%

2、微热乙醇定容至50ml，摇匀，得浓度为0.1mg·ml-1的标准液[7]。准确吸取标准液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml于6支具塞试管中，加30%乙醇，使各试管溶液为5ml，各加5%NaNO2溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加1mol·L-1NaOH溶液4ml，蒸馏水0.4ml，摇匀，放置10至15min，用85%的乙醇作空白对照，于510nm波长下测定吸光度，以吸光度值对芦丁对照品含量绘制标准曲线，回归方程A=1.1049C+1.6×10-3，其线性范围为0～0.5mg，

3、相关系数r=0.9998。　　2.1.2百合总黄酮的微波提取准确称取百合粉末2.00g置烧杯中，根据试验设计分别选用不同超声波频率、固液比、处理时间、乙醇浓度进行总黄酮提取。在用微波处理前，每个样品瓶所配5瓶空白瓶，均需凉至室温，以减少试验误差[7～9]。准确吸取4ml经微波提取的粗提液于装有200mg聚酰胺粉的小烧杯中，搅匀，然后转移至装有400mg聚酰胺粉的砂芯层析柱中(已用70%乙醇预处理)，吸附10min，用乙醇的不同浓度梯度逐级洗脱，以70%，80%，90%，100%的乙醇各10ml依次洗涤，收集各级洗涤液，用85%的乙醇定容至50ml，备测。

4、　　2.1.3百合总黄酮含量测定精确吸取5ml样液3份于3支具塞试管中，各加5%NaNO2溶液0.3ml，摇匀，放置6min，各加10%Al(NO3)3溶液0.3ml，摇匀，放置6min，各加1mol·L-1NaOH溶液4ml，蒸馏水0.4ml，摇匀，放置10至15min，用85%的乙醇作空白对照，于510nm波长下测定吸光度A。总黄酮得率按下式计算：　　得率(%)=(C×V1×V3)/(g);V1为抽提定容的体积(ml);V2聚酰胺处理时取样的体积(ml);V3聚酰胺处理后定容的体积(ml);V4显色反应测定取用样液体积(ml);v2:样品消耗硫代硫酸

5、钠标准溶液体积，mlv1:空白试剂消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，mlC:硫代硫酸钠标准溶液的浓度，moL/Lm:样品质量，g　　滴定步骤:称取3.00g混匀的样品，置于250ml碘瓶中，加30ml三氯甲烷-冰乙酸混合液，使样品完全溶解。加入1.00ml饱和碘化钾溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min。取出时加水100ml水，摇匀，立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液(0.002mol/L)滴定，至淡黄色时，加1ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点。以同样方法，做空白试剂实验。表1因素水平　　3结果　　3.1百合总黄酮含量的结果　　3

6、.1.1微波提取百合总黄酮正交实验结果及极差分析见表2。表2优化提取条件正交实验结果与分析　　由表2的极差R分析可知：4因素对总黄酮提取率影响的主次顺序为D>A>B>C，即微波处理时间>乙醇浓度>固液比>微波功率。确定最佳工艺条件为A3B3C4D4，即乙醇浓度80%，微波功率620in，固液比1∶20。通过验证试验，测得总黄酮含量为6.78%。　　3.1.2试验的方差分析对试验数据进行方差分析，提取时间对百合总黄酮得率的影响显著，其余诸因素均为非显著。方差分析结果见表3。　　3.1.3微波提取与其他提取方法的比较选取同

7、条件进行微波、超声循环提取、索氏提取比较。结果见表4。由表4可见，与超声循环提取法以及索氏提取法相比，微波提取技术大大缩短了提取时间，而且提取率有所增加。因此，微波提取法节能、省时、高效，适合应用于工业化生产。表3方差分析　表4微波提取与其他提取方法的比较　　3.2抗氧化活性结果分析影响黄酮类化合物抗氧化活性的因素，最主要的是羟基化的程度和羟基位置。一般来说，B环中的邻二羟基对黄酮类化合物的抗氧化活性起主要作用。黄酮类于O2-·、-OH的反应相当于一个连锁反应在终结阶段的反应，在消除O2-·、-OH的反应中起着氢供体的作用，使具有高度氧化活性的自由基还原

8、，从而达到消除的目的[14～19]。　　将纯猪油及添加0.01%，0.02%，0