小鼠同种异基因骨髓移植agvhd动物模型的建立论文

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1、小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立论文【摘要】目的：建立一个稳定可靠的异基因骨髓移植(allogeneicbonemarroousemodelofacutegraft-versus-hostdisease(aGVHD)afterallogeneicbonemarroentalstudiesofaGVHD.Methods：MaleC57BL/6(H-2b)micealeBALB/C(H-2d)miceasrecipients.AllBALB/C(H-2d)micelydividedinto7groupsandreceivedtotalbo

2、dyirradiation(TBI)8.0Gyat4～6hourspriortotransplantation.Bonemarroixede，leucocytecountsofperipheralblood，clinicalandpathologicmanifestationsofaGVHDiceinthegroupinfusedarroicesurvivedforalongperiod(30d).TherearroarroanifestationsofaGVHDatarelativelyconcentratedtime(8～15d).Conclu

3、sion：ToestablishamicemodelofaGVHDneedsadditionaldonor’sspleencells.Infusionofbonemarroousemodelafterallogeneicbonemarroice;allogeneicbonemarroalmodel迄今为止，移植物抗宿主病(graftversushostdisease，GVHD)仍是影响异基因骨髓移植(allogeneicbonemarrog/L)和庆大霉素(320mg/L)的无菌水，并持续至移植后3周，进行肠道净化。1.2.2供鼠骨髓细胞及脾细胞制

4、备：采用颈椎脱位法将供鼠处死，75%乙醇浸泡消毒5min后，在超净台内无菌切取股骨、胫骨及脾脏，剪开股骨、胫骨两端骨骺，用注射器吸取RPMI1640液反复冲洗髓腔，200目金属网过滤制备单细胞悬液，离心后去上清，裂解红细胞后用不含血清的RPMI1640培养液洗涤2次，细胞计数并调成所需细胞浓度备用(1×108/mL)，台盼蓝染色活细胞数95%。脾脏剪成小块后在200目金属网上用注射器针芯轻轻研磨，同时用RPMI1640液冲洗过滤成单细胞悬液，离心后去上清液，裂解红细胞，用不含血清的RPMI1640培养液洗涤2次，细胞计数并调成所需细胞浓度备用(1×

5、108/mL)，台盼蓝染色活细胞数95%。1.2.3受鼠的分组及移植过程：实验动物按移植物不同随机分为7组，每组8只(见表1)。移植当日将受鼠装入自制无菌包装的有孔塑料盒内，接受直线加速器全身照射(totalbodyirradiation，TBI)，剂量：8.0Gy，照射距离：50cm，照射时间：8min，剂量率：1.0Gy/min。TBI后4～6h内经尾静脉注入移植物(骨髓细胞按受鼠体重2×108/kg的标准输注)。移植物根据分组按不同的细胞数混合，每只受鼠输入细胞体积≤0.5mL。1.3移植物抗宿主病的监测指标及判定标准1.3.1观察指标。观察

6、小鼠的生存期，计算生存率;观察各移植组有无腹泻、体重下降、弓背、活动度下降及皮肤脱毛溃疡等临床表现，并予以临床aGVHD评分1。定期球后静脉取血计数各组外周血白细胞;病理检查：取濒死小鼠的皮肤、小肠及肝组织作病理切片HE染色，光镜下观察。按ThomasGVHD病理组织学分级标准2判定。1.3.2判断标准。移植失败：照射后很快死亡，死亡时外周血白细胞计数0.5×109/L。aGVHD发生：外周血白细胞计数0.5×109/L;并有倦怠、精神萎靡、嗜睡、纳差、体重减轻、弓背、脱毛及竖毛、腹泻等症状;病理检查可见肝、肠、皮肤等组织淋巴细胞浸润，正常组织结构

7、破坏，伴有局灶性出血等改变。移植后感染：外周血白细胞0.5×109/L，外周血见中性粒细胞核左移，胞浆中有中毒颗粒。造血衰竭：死亡时外周血白细胞0.5×109/L。造血重建：状态好，体重增加，外周血白细胞0.5×109/L。长期生存：造血免疫重建，生存期30d，体重、饮食、活动均正常。1.4统计学处理方法多组计量数据比较先进行正态性及多个方差齐性检验，满足条件的采用方差分析，如有差别用LSD-t法再行两两比较。检验水准a=0.05(双侧)，用Kaplan-Meier法绘制各组大鼠生存曲线。2结果2.1观察比较各组小鼠的一般情况及生存期A组小鼠于照射

8、后体重进行性下降，伴活动减少，皱毛、弓背，但无腹泻。照射后第6天开始有小鼠死亡，第11天全部死亡，中位生存时间为8.5d，