供体treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后gvhd和造血重建的影响

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1、供体TReg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和造血重建的影响作者：杨凯，刘启发，范志平，张钰【摘要】　　本研究探讨供体CD4+CD25+调控T细胞(regulatoryTcell,TReg)输注对异基因骨髓移植(alloBMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)和造血重建的影响。建立C57BL/6→BALB/c小鼠alloBMT模型，体外磁珠分离纯化供鼠外周血CD4+CD25+TReg细胞，接受移植的小鼠随机分为3组，在移植骨髓后6-8小时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞和RPM

2、I1640培养液（空白对照）。以移植后GVHD表现，肝、脾、小肠组织病理形态、生存期及白细胞(T后输注供体TReg细胞可以减轻移植后GVHD程度，延长小鼠生存期，促进造血重建。【关键词】异基因骨髓移植CD4+CD25+调控T细胞移植物抗宿主病造血重建　　InfluenceofDonorTRegCellsonGVHDandHematopoieticReconstitutionafterAllogenEicBoneMarroarroatopoieticreconstitutionofmice,analloBMTmode

3、lofC57BL/6→BALB/cmiceagicactivatedcellsseperatedfromdonormiceperipheralblood.Therecipientmicelydividedintothreegroups:CD4+CD25+Tcells,CD4+CD25-TcellsandRPMI1640culturemedium.ThesecellsandRPMI1640icebycaudalveinsatabout6to8hoursafteralloBMTrespectively.Incidenc

4、eofGVHD,pathologicallesionofliver,spleen,smallintestine,survivaltimeandhematopoieticreconstitutionintherecipientseforT,respectively,theGVHDinTRegpositivecellgroupanifestationsoftheliver,spleenandsmallintestineinTRegpositivecellgroupeansurvivaltimeinthreegroupsi

5、tigatetheGVHDsoasto　Keyatopoieticreconstitution影响异基因造血干细胞移植(alloHSCT)预后的主要原因之一是移植物抗宿主病(GVHD)，如何从根本上降低移植后GVHD及与GVHD相关的致死性并发症是亟待解决的难题。CD4+CD25+调控T细胞(regulatoryTcell,TReg)是一群表型和功能特异的T细胞，在体内能诱导免疫耐受。自身免疫性疾病和肿瘤治疗方面的研究发现TReg细胞对效应性T细胞有强大的抑制作用［1，2］，因此不难理解TReg细胞在以效应性T细胞

6、作用为主的alloHSCT后GVHD的发生过程中亦有重要作用。我们建立C57BL/6→BALB/c小鼠异基因骨髓移植(alloBMT)模型，观察移植后输注供鼠TReg细胞对alloBMT后GVHD和造血重建的影响，目的在于探讨其在alloHSCT过程中的应用潜能。材料和方法实验小鼠供鼠采用6-8周龄清洁级C57BL/6(H2b)雄性小鼠；受鼠采用6-8周龄清洁级BALB/c(H2d)雌性小鼠，供受鼠全部由南方医科大学实验动物中心提供，均为清洁级动物，饲养条件符合SPF标准。主要试剂及器材小鼠CD4+CD2

7、5+T细胞磁珠分离试剂盒为RDSystems公司产品，MiniMACS磁座为MiltenyiBiotec公司产品，PE标记抗小鼠CD25及PE/Cy5标记抗小鼠CD4单克隆抗体为Biolegend公司产品，DNA基因组提取试剂盒及DNAMarker购自上海申能博彩公司，ExTaqDNA聚合酶、dNTP为TaKaRaBiotec公司产品，RPMI1640为Gibco公司产品。小鼠alloBMT模型的建立6-8周龄清洁级BALB/c健康雌性小鼠共48只作为受鼠，体重18-22g。移植预处理方案：受鼠受X线直线加速器全身

8、照射，总剂量8.0Gy，剂量率0.5Gy/min；照射前1天予腹腔注射环磷酰胺(60mg/kg)。照射后即在空气层流房中无菌饲养。选择C57BL/6雄性小鼠为供鼠，无菌取小鼠股骨和胫骨骨髓，制成骨髓单个核细胞悬液，用RPMI1640培养液调整细胞数为2×108/ml；同时取供鼠脾脏，制备脾细胞悬液，以RPMI1640培养液调整细胞数为4×108