分子信标实时定量pcr法检测胃癌中survivin基因mrna的表达论文

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1、分子信标实时定量PCR法检测胃癌中Survivin基因mRNA的表达论文.freelRNA的表达量，并分析其与临床资料之间的关系。方法设计Survivin基因特异性分子信标探针和引物，以cDNA克隆重组质粒为标准品，建立Survivin基因实时定量检测方法；并检测胃癌样本中Survivin基因mRNA的模板拷贝数。结果Survivin基因mRNA分子信标实时定量检测方法的线性范围为103～1010拷贝数.freelRNA模板拷贝数差异有显著性（P＜0.05）；胃癌样本中mRNA模板拷贝数与淋巴结转移和2年生存期以及病理类型相关（P＜0.0

2、5）。结论成功建立Survivin基因分子信标实时定量检测方法。胃癌中该基因表达的模板拷贝数可作为预测淋巴结转移、评价预后的一个重要指标。【关键词】分子信标；实时定量PCR；Survivin；胃癌分子信标；实时定量PCR；Survivin；胃癌RealTimePCRdetectionofSurvivinexpressionbymolecularbeaconingastriccarcinoma【Abstract】ObjectiveTodeveloparealtimefluorescentquantitativemethodbasedonmo

3、lecularbeacontechniqueandquantificationofmRNAexpressionofsurvivingeneingastriccarcinoma.MethodsAmolecularbeaconprobeandprimersidcontainingthesequenceofsurvivina，andrelationshipbetathanintheothergroups(P＜0.05).Therephnodemetastasis，poorsurvivalandhistologicaltypes.Conclusi

4、onThemethodcandetectcopiesofsurvivinexpression.Itmightbeanimportantindicatorinpredictinglymphnodesmetastasisandevaluatingtheprognosis.【Keyolecularbeacon；realtimePCR；survivin；gastriccarcinoma实时定量PCR方法是近年发展起来的一种新的PCR定量技术，由于在PCR反应中引入了荧光探针，可以通过检测扩增过程中荧光信号的有无和强弱来判定目的基因的有无及表达量多

5、少。分子信标（molecularbeacon）探针就是其中一种荧光探针，它是在核酸杂交原理和荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)现象的基础上开发出来的，可用于实时定量检测基因的表达水平［1，2］。Survivin是1997年［3］发现一种特殊结构和性质的凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosis，IAP），它在终末分化的成人组织中很少表达，而在绝大多数肿瘤细胞中高表达［4～6］。本研究应用分子信标探针实时定量PCR技术检测了胃癌组织中Survivin基因的mRNA

6、表达情况，分析其与不同病理类型及临床资料之间的关系，探讨Survivin基因在胃癌的诊断、治疗和预后等方面的可行性。1材料与方法1.1标本收集随机收集天津医科大学附属肿瘤医院胃肠肿瘤外科2001年11月～2003年11月手术切除的胃癌组织标本69组，每组包括肿瘤组织、癌旁组织、手术切端正常组织三份标本，离体后立即放入液氮中，后转入-80℃冰箱保存。男38例，女31例；年龄38～86岁，中位年龄56岁；按国际抗癌联盟（UICC）胃癌TNM分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期23例，Ⅲ期29例，Ⅳ期14例；按组织学类型分类：低分化腺癌22例，乳头状腺癌2例，

7、管状腺癌13例，黏液腺癌5例，黏液细胞癌10例，印戒细胞癌2例，混合性癌15例；按分化程度分组：乳头状腺癌和管状腺癌为分化较好组15例，其余为分化较差组54例；按生存期分组：24个月无转移复发为生存组，有转移复发或死亡为转移死亡组。经病理证实的胃良性标本47例，其中胃息肉1例，幽门口溃疡1例，胆汁反流胃炎1例，球部溃疡1例，豆疹样胃炎1例，慢性胃炎42例。1.2定量检测标准品制备——Survivin基因cDNA克隆克隆方法如文献［7］所述，概括如下：取胎儿的脾脏提取总RNA，RT-PCR方法扩增出Survivin基因读码框部分cDNA，构

8、建重组质粒。经序列分析证实克隆成功后，小量制备重组质粒，RNaseA消化RNA并纯化后，以260nm吸光度值计算含量，根据分子量计算拷贝数；倍比稀释后作为实时荧光定量检测的标准品。1.3引物和