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《基于分子信标探针的荧光定量pcr方法检测转基因食品》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、应用与环境生物学报2006,12(2):273~277ChinJApplEnvironBiol=ISSN1006687X20060425基于分子信标探针的荧光定量PCR方法*检测转基因食品1**11222刘光明苏文金蔡慧农蔡海松林新坚张伟光(1集美大学生物工程学院福建厦门361021)(2福建省农业科学院福州350013)摘要选择了内源基因大豆植物凝集素(lectin)、玉米转化酶(invertase)和外源基因花椰菜花叶病毒35S(CaMV35S)启动子的分子信标探针,确定了探针浓度和镁
2、离子浓度等反应条件,分别对转基因大豆和转基因玉米系列标准品进行内源基因和外源基因的荧光PCR扩增,在PCR反应过程中分别以两种荧光通道信号分别追踪同一样品DNA内源基因和外源基因的扩增动力学变化,并依此绘制了循环阈值与转基因食品百分比含量之间的标准曲线,建立了转基因大豆和转基因玉米的分子信标探针-荧光定量PCR检测方法,该方法具有特异性强、敏感性高的特点,实现了对转基因食品的定量分析.图7表1参11关键词转基因食品;分子信标探针;荧光PCR;定量PCRCLCTS207.3Q78FluorescenceQuantitati
3、vePCRDetectionofTransgenicFood*BasedonMolecularBeaconProbe1**11222LIUGuangming,SUWenjin,CAIHuinong,CAIHaisong,LINXinjian&ZHANGWeiguang(1SchoolofBiotechnology,JimeiUniversity,Xiamen361021,Fujian,China)(2FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China)Abstract
4、Primersandmolecularbeaconprobesofendogenousgenelectin,invertase,andexogenousgeneCaMV35Spromoterweredesigned.Thereactionconditions,includingprobeconcentrationandMgCl2concentrationwereoptimized.Geneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaizereferencematerialswe
5、redetectedbyfluorescencePCRamplificationofendogenousgeneandexogenousgene.ThestandardcurvesofCtbetweenendogenousgeneandexogenousgenevs.thetransgenic-contentinreferencematerialsweregeneratedandalinearregressionequationcouldbeobtained.Molecularbeacon-fluorescencequa
6、ntitativePCRmethodwasestablishedtodetectgeneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaize.Themethodwasusedtoquantitativelydetectandidentifytransgenicfood.Fig7,Tab1,Ref11Keywordstransgenicfood;molecularbeaconprobe;fluorescencePCR;quantitativePCRCLCTS207.3Q78[2
7、]国际农业生物技术应用署最新公布的统计数据表明,2003外源DNA为目标两类,检测表达蛋白质的方法(如ELISA42年全球转基因作物种植面积达到677010hm,其中种植面法)具有灵敏度较高、特异性强的优点,但存在覆盖率低、难以42积居前两位的是转基因大豆与玉米,分别达到414010hm检测深加工产品等缺点;检测外源DNA方法(如PCR法)以其42[1]和155010hm.随着转基因农产品的不断开发和利用,高灵敏性、特异性较好和快速简便的优点被广泛采用,但常规转基因产品对人类健康和生态环境的影响已受到了全世界的PCR技术存
8、在的问题是可能产生假阳性结果和不能进行定量[3]广泛关注.不论是对转基因产品进行标注管理,或是对转基因检测.与非转基因原料的分别输送,转基因原料和食品的检测技术是荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQPCR)技必不可少的,这是对转基因产品
