有关分子信标实时定量pcr法检测胃癌中survivin基因mrna的表达

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1、有关分子信标实时定量PCR法检测胃癌中Survivin基因mRNA的表达:郑红，孙保存，王立梅，李希，王家仓【目的采用分子信标实时定量PCR方法检测胃癌样本中Survivin基因mRNA的表达量，并分析其与临床资料之间的关系。方法设计Survivin基因特异性分子信标探针和引物，以cDNA克隆重组质粒为标准品，建立Survivin基因实时定量检测方法；并检测胃癌样本中Survivin基因mRNA的模板拷贝数。结果Survivin基因mRNA分子信标实时定量检测方法的线性范围为103～1010拷贝数，批间变异为28.16%，批内变异为13.34%，灵敏度为42个拷贝数，均匀回收率为109.83

2、%；胃癌组织、癌旁组织和正常组织以及胃良性病变组织间比较，mRNA模板拷贝数差异有明显性（P＜0.05）；胃癌样本中mRNA模板拷贝数与淋巴结转移和2年生存期以及病理类型相关（P＜0.05）。结论成功建立Survivin基因分子信标实时定量检测方法。胃癌中该基因表达的模板拷贝数可作为猜测淋巴结转移、评价预后的一个重要指标。【分子信标；实时定量PCR；Survivin；胃癌分子信标；实时定量PCR；Survivin；胃癌RealTimePCRdetectionofSurvivinexpressionbymolecularbeaconingastriccarcinoma【AbstractObje

3、ctiveTodeveloparealtimefluorescentquantitativemethodbasedonmolecularbeacontechniqueandquantificationofmRNAexpressionofsurvivingeneingastriccarcinoma.MethodsAmolecularbeaconprobeandprimersidcontainingthesequenceofsurvivina，andrelationshipbetathanintheothergroups(P＜0.05).Therephnodemetastasis，poorsur

4、vivalandhistologicaltypes.ConclusionThemethodcandetectcopiesofsurvivinexpression.Itmightbeanimportantindicatorinpredictinglymphnodesmetastasisandevaluatingtheprognosis.【Keyolecularbeacon；realtimePCR；survivin；gastriccarcinoma实时定量PCR方法是近年发展起来的一种新的PCR定量技术，由于在PCR反应中引进了荧光探针，可以通过检测扩增过程中荧光信号的有无和强弱来判定目的基因的

5、有无及表达量多少。分子信标（molecularbeacon）探针就是其中一种荧光探针，它是在核酸杂交原理和荧光共振能量转移(fluorescenceresonanceenergytransfer，FRET)现象的基础上开发出来的，可用于实时定量检测基因的表达水平［1，2］。Survivin是1997年［3］发现一种特殊结构和性质的凋亡抑制蛋白（inhibitorofapoptosis，IAP），它在终末分化的成人组织中很少表达，而在尽大多数肿瘤细胞中高表达［4～6］。本研究应用分子信标探针实时定量PCR技术检测了胃癌组织中Survivin基因的mRNA表达情况，分析其与不同病理类型及临床资料

6、之间的关系，探讨Survivin基因在胃癌的诊断、治疗和预后等方面的可行性。1材料与方法1.1标本收集随机收集天津医科大学附属肿瘤医院胃肠肿瘤外科2001年11月～2003年11月手术切除的胃癌组织标本69组，每组包括肿瘤组织、癌旁组织、手术切端正常组织三份标本，离体后立即放进液氮中，后转进-80℃冰箱保存。男38例，女31例；年龄38～86岁，中位年龄56岁；按国际抗癌同盟（UICC）胃癌TNM分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期23例，Ⅲ期29例，Ⅳ期14例；按组织学类型分类：低分化腺癌22例，乳头状腺癌2例，管状腺癌13例，黏液腺癌5例，黏液细胞癌10例，印戒细胞癌2例，混合性癌15例；按分化程度分组

7、：乳头状腺癌和管状腺癌为分化较好组15例，其余为分化较差组54例；按生存期分组：24个月无转移复发为生存组，有转移复发或死亡为转移死亡组。经病理证实的胃良性标本47例，其中胃息肉1例，幽门口溃疡1例，胆汁反流胃炎1例，球部溃疡1例，豆疹样胃炎1例，慢性胃炎42例。1.2定量检测标准品制备——Survivin基因cDNA克隆克隆方法如文献［7］所述，概括如下：取胎儿的脾脏提取总RNA，RT-PCR方法扩增出Su