实时定量pcr检测cml患者hmga2基因表达的研究论文

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1、南方医科大学硕士学位论文实时定量PCR检测CML患者HMGA2基因表达的研究姓名：欧阳凌云申请学位级别：硕士专业：内科血液病学指导教师：刘晓力20080501硕士学位论文实时定量PCR检测CML患者HMGA2基因表达的研究硕士研究生：欧阳凌云指导教师：刘晓力教授摘要研究背景和目的HMGA2是高迁移率蛋白(hi曲mobilitygroup，HMG)家族成员，是一种小分子核染色质结合蛋白。HMG家族因其成员分子量较小，可在聚丙烯酰胺凝胶电泳中快速迁移而得名。其蛋白氦基端含有3个短的基础重复序列编码结构域，能与DNA分子小沟内的A．T丰富区结合，称之为AT-ho

2、oks结构。HMGA2本身没有转录活性，但可作为构筑因子，与DNA结合并改变其空间结构，通过复杂的蛋白．DNA、蛋白．蛋白相互作用网络，统筹核蛋白复合物的装配，从而调控多种基因转录。HMGA2在人体正常生长发育中发挥重要作用。胚胎发育过程中，各组织广泛且高表达HMGA2，而在大多数正常成人组织则无表达或低表达。研究发现，多种良恶性肿瘤包括血液系统肿瘤均存在HMGA2过度表达或基因重排后的异常表达，引起了人们对HMGA2在肿瘤发生发展过程中所起作用的关注。多项体内外实验显示了HMGA2的致癌活性，丽阻断其表达则可能抑制肿瘤生成。例如在逆转录病毒作用后的鼠甲状

3、腺细胞中，只有发生恶性转化的细胞中能测得HMGA2表达；在表达全长或截短型HMGA2的转基因小鼠中可观察到数静良性肿瘤生成：在鼠甲状腺细胞株FRTL5中转染HMGA2反义载体，再与骨髓增殖性肉瘤病毒或柯薪顿鼠肉瘸病毒等作用居发现，与来转染反义载体或转染正常中文摘要HMGA2的细胞相反，细胞未能在软琼脂培养基上增殖，也未能在裸鼠中转化成肿瘤。目前认为，HMGA2参与肿瘤发生发展的机制包括：①抑制DNA修复系统激活，包括与核苷酸切除修复基因ERCCl的启动子结合并抑制其活性、直接抑制DNA双链断裂的修复信号通路的激活等。②通过多种途径干扰正常细胞周期，如与pR

4、B／E2F1复合物结合，通过替换组蛋白去乙酰化酶1(HDACl)，增强E2F1及DNA结合组蛋白乙酰化，诱导并增强E2F1活性，促使细胞进入S期并增殖。⑧通过上皮间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)作用诱导肿瘤发生。最近研究发现，可由TGF．13通过smad途径诱导HMGA2从而触发EMT。④染色体重排导致HMGA2的3’．非翻译区(3’untranslatedregion，3'UTR)缺失。截短型HMGA2失去其位于3’UTR的多标记位点，无法与let．7等microRNAs结合，从而失去microRNA对

5、HMGA2表达的抑制作用，最终诱发肿瘤。HMGA2在血液系统肿瘤中研究较少，最初有学者利用常规RT-PCR方法在慢性髓系白血病及急性髓系白血病患者的外周血、健康志愿者及上述患者的CD34阳性造血干细胞中检测到HMGA2表达，研究者认为HMGA2在白血病患者中的表达可能是由于异常造血干细胞增殖导致，并有可能成为检测某些类型白血病的敏感标志。染色体12q13．15区重排在发生Richter转化的慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、骨髓纤维化伴骨髓化生、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病等患者中有报道，利用FISH等研究发现存在涉及HMGA2的重排，进一步观

6、察认为发生HMGA2重排的患者大多数预后不佳。最近Meyer等首次定量检测了CML患者HMGA2基因表达水平，发现在l例CML加速期(CML．acceleratedphase，AP)及l例急变期(CML．blasticphase，BP)患者中，HMGA2基因表达水平与慢性期(CML．chromcphase，CP)患者相比较高，推测可能是由于白血病细胞过度增殖导致。CML是起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病，费城染色体及bcr／abl融合基因为其恶性克隆标志。t(9；22)(q34；q11)染色体异位形成bcr／abl融合基因。目II硕士学位论文前认为，b

7、cr／abl融合基因编码的P210蛋皇具有异常增高的酩氮酸激酶活性，可导致下游～系列信号持续磷酸化，产生造血干细胞增殖失控、凋亡受阻、黏附功能缺陷等病理生理改变，是CML发病的主要原因。CML发病可分隽CP、AP及BP，CML．CP病情较为隐匿，而进入AP／BP后，患者往往对治疗反应差，病情进展遗速。CML急交往往伴有bcr／abl融合基因表达增高，PTK活性增强。急变机制目前仍未完全清楚，现普遍认为，CML急变涉及基因组不稳定性、分化障碍、端粒缩短及抻癌基嚣失活等，是一个涉及多基嚣、多途径的复杂过程。为了探讨HMGA2与CML发展过程的联系，我们选取处于

8、不同进展时期的CML患者井周矗为研究对象，采雳TaqMan探针法实