毛细管气相色谱法测定糜蛋白酶中残留有机溶剂

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1、毛细管气相色谱法测定糜蛋白酶中残留有机溶剂【摘要】目的建立测定糜蛋白酶中有机溶剂丙酮残留量的方法。方法采用毛细管气相色谱法,色谱柱为Supelco25301-U型石英毛细管柱，检测器为氢火焰离子化检测器，载气为高纯度氮气，水为溶解介质，检测了糜蛋白酶中丙酮的残留量。结果丙酮在样品中达到完全分离,在1．59~25．50ppm浓度范围内具有良好的线性,线性方程为A=306．0C+184．3，r=0．9995，检测限为0．03ppm,方法回收率为99．9％，RSD为1．7%。结论本法能快速准确的检测糜蛋白酶中有机溶剂丙酮残留量,可用于糜蛋白酶质量控制中的有机残留溶剂检查。【关键词】气相色谱法;糜蛋白

2、酶;有机溶剂残留量DeterminationofacetoneresidueinchymotrypsinbycapillarygaschromatographyMINGuang-qing.DeyangSinozymePharmaceuticalCo.,LtdSichuan，Deyang，618304，China【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationacetoneresidueinchymotrypsin.MethodsAcapillarygaschromatography6methodwasadopted：thecolumnw

3、asSupelco25301-Uquartzcapillarycolumn,detectorwasFID,thecarriergaswasNitrogengas.Waterwassolventmedia.ResultsThelinearrangewas1．59-25．50ppm(r=0．9995)，withtheaveragerecovery99．9%(RSD1．7%)anddetectability0．03ppm.ConclusionTheacetoneresidueinchymotrypsincanbedeterminedsensitivelyandacturelybycapillaryG

4、C.【Keywords】CapillaryGC;Chymotrypsin;Organicsolvent糜蛋白酶是从牛、猪胰脏中提取制得，糜蛋白酶在胰脏中以酶原(牛糜蛋白酶原A、B1或猪糜蛋白酶原A、B、C)的形式存在，通过激活，而形成相应的糜蛋白酶。糜蛋白酶具有蛋白水解作用，主要水解由芳香族氨基酸，如苯丙氨酸、酪氨酸等的羧基与其他氨基酸的氨基所形成的肽键，糜蛋白酶具有抗炎、扩张血管、水解蛋白质等作用。临床上主要用于各种感染及炎症的辅助治疗,如颅内感染性炎症、呼吸系统、消化系统的感染及炎症，以及治疗毒蛇咬伤、黄蜂螫伤、蜈蚣咬伤等。由于糜蛋白酶精制过程中，采用丙酮进行重结晶，因此需对丙酮的残留量进

5、行检测。本研究用毛细管气相色谱法测定了糜蛋白酶中丙酮的残留量,方法准确可靠。61仪器和试剂色谱仪：GC-7900气相色谱仪(上海天美)，FA1004型电子天平(成都方舟科技开发公司)。试剂：色谱纯丙酮、双蒸水。试药：糜蛋白酶中试产品三批(德阳新诺赛制药有限公司，批号分别为D050301、D050302、D050303)。2方法与结果2．1色谱条件色谱柱：Supelco25301-U型石英毛细管柱，30m×0．53mm，1μFilm；检测器：FID；载气为高纯度氮气；进样口及检测器温度均为200℃，柱温50℃，柱前压5．7Psi，分流比50∶1，进样量1μl。2．2对照品溶液的配制精密量取丙酮0

6、．2ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取0．4ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含丙酮6．376×10-6mg即6．376ppm(丙酮的密度为0．797mg/ml,1ppm=1μg/L)的对照品溶液。2．3供试品溶液的配制取本品(批号分别为D050301、D050302、D050303)各约0．5g，精密称定，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，振摇使溶解，即得供试品溶液。2．4系统适应性试验精密量取溶剂水、丙酮对照品溶液、供试品溶液各16μl,注入色谱仪，记录色谱图。结果溶剂不干扰丙酮的测定，供试品溶液除溶剂峰以外，无丙酮峰及其他杂质峰出现，不干扰

7、丙酮的测定。对照品溶液主峰分离度为2．728,理论塔板数为13518,可用于测定，色谱图见图1。2．5标准曲线的制备精密量取丙酮0．2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀,得浓度为1．594×10-3mg/ml对照品贮备液，即1594ppm的对照品贮备液，精密量取贮备液1．6、1．2、0．8、0．4、0．2、0．1ml,置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，得系列浓度的对照品溶液，分别进样