亚低温对缺氧-复氧内皮细胞胞间黏附分子1表达和黏附率的影响

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1、亚低温对缺氧/复氧内皮细胞胞间黏附分子1表达和黏附率的影响【摘要】目的观察亚低温对缺氧/复氧内皮细胞胞间黏附分子1(ICAM1)表达和黏附率的影响。方法以ECV304内皮细胞为研究对象,利用简易缺氧室,以缺氧模拟体内缺血性损伤，建立缺氧/复氧内皮细胞模型。将细胞分为33℃及37℃缺氧/复氧组。各组又分为缺氧6,12,18h后再复氧6h3个亚组。应用1的表达并应用细胞计数法检测各亚组细胞和中性粒细胞(PMN)的黏附率。结果①在缺氧6，12，18h亚组，37℃组内皮细胞表达ICAM1的积分光密度值明显高于33℃组〔（0.185±0.026）vs(0.120±0.06

2、4）、(0.329±0.057)vs(0.218±0.027)、(0.443±0.068)vs(0.326±0.019)〕(P均＜0.05)。②在缺氧6，12，18h亚组，33℃组内皮细胞和中性粒细胞的黏附率明显高于37℃组〔(29.41±1.77)%vs(22.30±3.25)%、(43.66±2.57)%vs(34.51±5.06)%、(62.92±4.82)%vs(49.68±4.34)%〕（P＜0.05）。结论亚低温能有效抑制缺氧/复氧内皮细胞与中性粒细胞的黏附，其机制可能与降低缺氧/复氧内皮细胞ICAM1的表达有关。【关键词】亚低温；缺氧/复氧内皮细胞；胞间黏

3、附分子1；黏附率【Abstract】ObjectiveToobservetheinfluenceofmildhypothermiaonexpressionofintercellularadhesionmolecule(ICAM)1andadhesivepropertiesofhypoxia/reoxygenation(H/R)stimulatedendothelialcells.MethodsECV304endothelialcellspleandanoxicboxitatethemodelofischemiainducedinjureandtobuildthemod

4、elofH/Rstimulatedendothelialcells.ThecellsulatedendothelialcellsandPMN.Results①Hypoxiafor6,12and18h,theintegralabsorbancevaluesofICAM1proteinin37℃groupulatedendothelialcellsandPNMin33℃groupiacaneffectivelyrestraintheadhesionbetulatedendothelialcellsandPMN,andmechanismofayberelatedtodecr

5、easingtheexpressionofICAMlofH/Rstimulatedendothelialcells.【Keyia；Hypoxia/reoxygenationstimulatedendothelialcells；ICAM1；Adhesiveproperties近年发现,缺血再灌注(I/R)脑损伤的病理过程中存在着炎症反应。在缺血区脑组织,大量中性粒细胞和单核细胞的聚集浸润使脑损伤加重,而缺血区微血管内皮细胞粘附分子的表达,是白细胞和单核细胞聚集浸润的先决条件。随着对亚低温的深入研究,许多研究已证实亚低温对I/R损伤后脑组织具有明显的保护作用〔1，2〕

6、。但体外直接研究亚低温对脑缺血后炎症反应的影响的报道较少，因此,我们在体外建立亚低温缺氧/复氧内皮细胞模型的基础上，观察了亚低温对缺氧/复氧内皮细胞胞间黏附分子(ICAM)1表达以及和中性粒细胞黏附率的影响，探讨亚低温对脑缺血病理损伤的干预作用及其机制。1材料和方法1.1主要试剂和材料人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞(购自武汉大学典型培养物保藏中心)，RPMI1640(Hyclone),胎牛血清(CLARK),青链双抗(Hyclone),0.25%胰酶(Hyclone),Dhanks(Hyclone),台盼兰（Sigma）,Hepes(Sigma)，淋巴细胞分离液(

7、Sigma)，小鼠抗人ICAM1多克隆抗体(RD公司)。1.2主要仪器二氧化碳培养箱(SHELLAB公司),倒置显微镜(CK40型,Olympus公司),自制缺氧装置。1.3方法1.3.1细胞培养人脐静脉内皮细胞株ECV304(购自武汉大学典型培养物保藏中心),培养基为RPMI1640(内含L谷氨酰胺2mmol/L),用Hepes调pH值至7.2,用前加10%灭活胎牛血清，双抗(青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml)。细胞在5%CO2，37℃培养箱中孵育培养,0.25%胰酶消化传代。当细胞生长至亚融合状态单层时进行