多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞生物学特性分析论文

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1、多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞生物学特性分析论文朱步东任军王湘漪李昕聂鋆【摘要】为了研究多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）病人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）的病理生物学特性，以探讨MSC在MM骨损伤发生中的作用，取11例初治MM病人和5例正常人骨髓，用贴壁法体外分离培养MSC。应用流式细胞术分析MM骨髓MSC表型，MTT法检测MSC增殖能力，组织化学染色测定细胞向成骨细胞和脂肪细胞分化能力。应用酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）测定细胞培养上清液中

2、白介素-6（interleukin-6，IL-6）和干细胞生长因子（stemcellfactor,SCF）浓度。收集MSC培养上清作为条件培养液，按梯度浓度加入人SKO007骨髓瘤细胞系培养体系中.freelalStemCellsDerivedfromBoneMarroaAbstractThestudyesenchymalstemcells(MSCs)inthepathogenesisofbonediseaseparticularlyobservedinmultiplemyeloma(MM),thebiologicalfeaturesofmarropatien

3、ts11nealadultsandMSCsetrictechnique.TheproliferationofMSCsicalstaining.TheconcentrationsofIL-6andSCFintheculturesupernatante-linkedimmunosorbentassay(ELISA).MSCculturesupernatantsedtoevaluatetheirsupportontheproliferationofanMMcelllineSKO007cells.TheresultsshoarroMMpatientsogenously

4、positiveforCD29,CD73,CD166andHLA-ABCandnegativeforhematopoieticcellmarkerCD45andendothelialcellmarkerCD31,thephenotypeofilartothatofmarronormaladults.MTTassayindicatedthatMSCsfromMMpatientsornormaladultsproliferatedatsimilarrates.MSCsfromMMpatientsoccupiedinvitroosteogenicandadipoge

5、niccapacityasthosefromnormaladults.ThelevelsofIL-6andSCFinculturesupernatantore,MSCculturesupernatantsfromMMbonemarrootetheproliferationofSKO007cells.Itisconcludedthatmarrobonemarroalintheirproliferationanddifferentiationcapacities,andmyelomabonediseasemaynotbeascribedtothedifferent

6、iationofMSCsayprovidenecessarycuesforthesurvivalofmalignantmyelomacells.Keyesenchymalstemcell;multiplemyeloma;cytokine多发性骨髓瘤（multiplemyeloma,MM）患者呈现特征性的骨质破坏。这种骨质损伤与破骨细胞数量增加，成骨细胞数减少，从而导致骨吸收与成骨之间失平衡有关［1］。间充质干细胞（mesenchymalstemcells,.freelCells公司产品），培养48小时后去除非贴壁细胞，继续培养至贴壁细胞约80%融合，收集培养上

7、清于-70℃冻存备用。0.05%胰蛋白酶消化传代培养。第3代细胞用于以下实验。细胞免疫表型分析胰蛋白酶消化收集MSC，加入FITC或PE标志的小鼠源抗人CD29、CD31、CD34、CD45、CD73、CD166、HLA-ABC和HLA-DR单克隆抗体（eBioscience公司产品），室温下避光反应30分钟。用PBS洗涤2次后，FACSCalibur(BectonDickinson，USA)收集细胞参数，用流式细胞仪检测，DI2.9软件分析结果。增殖能力的MTT法测定收集MSC，按750个细胞/孔接种于含MSC完全培养液的96孔培养板中，每组6孔；将SKO0

8、07细胞按1000/孔接种于不含血清的