ANXA2对结直肠癌发展的影响及信号通路的初步研究

《ANXA2对结直肠癌发展的影响及信号通路的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号Ｑ２９１密级学号１２２０７８■１機匪驅誦謝歴■■■硕±学位论文（学术型）题ＡＮＸＡ２对结直肠癌发展的影响目及信号通路的初步研究作者何慧敏指导教师侯颖春教授－级学科名称二级学科名称细胞生妨学提交日期二〇—五年五月？■学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行研巧工作所取得的研巧成果。尽我所知，除文中己经注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含本人或他人己申请学位或其他用途使用过的成果。对

2、本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确说明并表示谢意。本学位论文若有不实或者侵犯他人权利的一，本人愿意承担切相关的法律责任。？＾：０哥作者签名：日期＞年月日／学位论文知识产权及使用授权声明书本人在导师指导下所完成的学位论文及相关成果，知识产权归属陕西师范大学。本人完全了解陕西师范大学有关保存、使用学位论文的规定，允许本论文被査巧和借阅，学校有极保留学位论文并向国家有关部口或机构送交论文的纸质版和电子版，有权将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用任何复制手段保存和汇编本论文？本人保证毕化离校后，发表本论文

3、或使用本论文成果时署名单位仍为陕西师范大学。保密论文解密后适用本声明。：曰作者签名：柄ｉ終曰期＞ｒ年月．／摘要背景与目的一结直肠癌（Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ，ＣＲＣ）是最常见的消化道恶性肿瘤之，是多因素作用、多基因参与、多阶段形成的复杂病理过程，其发病率！＾及死亡率具有逐年上升的趋势，严重威胁着人类的生命及健康安全。结直肠癌的临床治疗主要包括手术、放疗、化疗、热疗及免疫治疗及传统的中医治疗，目前手术仍然是最主要而且最有效的方法，但是术后５年生存率却只有５０％。结直肠癌早期诊断困难、早期转移常见、对化疗的抗性Ｗ及化疗的巨

4、大毒性等都使其治疗与预后变得异常艰因此，对结直肠癌的早期诊断与新的治疗手段如基因治疗、靴向治疗等的研究就显得很重要。近年来研充已经证实，膜联蛋白Ａ２Ｕｗｗｊｃ切如，乂Ｍ０２）是与多种肿瘤的发生和发展密切相关的基因，其表达在人类绝大多数肿瘤中均上调，这种过表达现象可能与肿瘤的生长、浸润、转移等有关。研巧基因的功能常用基因敲除（Ｇｅｎｅｄｅｌｅｔｉｏｎ）或基因敲低（Ｇｅｎｅｉｎｈｉｂ扣ｏｎ）方法，前者是目前应用一较为广泛的基因组编辑技术之，其完全彻底、高度特异性的对铅基因表达的去除作用使其发展成为基因功能研巧强有力的手段。本研究采用传统基因敲除

5、技术，从基因组水平彻底消除＾＾２基因在人结直肠癌ｃａｃｏ２细胞中的表达，从而建立了完全无尚２表达的ｃａｃｏ２细胞系－－（＾ｉＶＸ４２／ｃａｃｏ２）。并通过对这种完全无表达细胞的増殖、运动等特性的检测，探索基因对ｃａｃｏ２细胞生物学行为的影响。在此基础上，利用双向电泳Ｗ及质谱分析等技术对＾义４２基因敲除结直肠癌细胞蛋白组学进行初步研巧，试图揭示＾如义４２基因敲除对结直肠癌ｃａｃｏ２细胞蛋白组的影响，获得可能与功能相关的基因成员，初步了解＾义４２在结直肠癌中的作用及可能的信号一通路组成，为进步深入研究Ｖ４ＷＺ４２在结直肠癌中的信号通路的调节和转导奠定

6、初步基础。此外，为了对文献多次报道的与瓜（２功能关系密切的组织纤溶酶原激活因＇‘子（ＴＶＭＭｅ如ＨｖｍＭｏｇｅｎａ如ｖａ／ｏｒ，化４）基因功能进行研究，并与心化４２基因敲除＞形成互对应研巧，本研究曾试图１ｔｉｌ１＾转录激活子样效应因子核酸酶（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｏｎａ－ａｃｔｉｖａｔｏｒｌｉｋｅｅｆｅｃｔｏｒｎｕｃｌｅａｓｅｓ，ＴＡＬＥＮ）技术为帮向基因编辑工具，试图从人结直肠癌细胞ｃａｃｏ２细胞中将基因敲除，Ｗ期得到敲除的ｃａｃｏ２细胞，再与本实验室己经构建好的敲除一ｃａｃｏ２细胞系共同作为研巧对象，进步了解Ｉ与两个肿瘤相关基因在结直肠癌ｃ

7、ａｃｏ２细胞中的相互作用及可能的作用机制，Ｗ深入探索与沁＾在人结直肠癌的发生与发展中的作用，从而为结直肠癌的早期诊断和治疗提供更为详实的理论和实验依据，为结直肠癌防治和预后评估提供新的思路。方法－村１．分ｉＶＺ４２基因敲除ｃａｃｏ２细胞系（蔚沿２心〇）２）的构建与鉴定（Ｗｅｓｔｅｒｎｏｔ）。２．检测细胞活性，并分析在不同时间点对ｃａｃｏ２细胞增殖能力的影响（ＭＴＴ法、倒置芙光显微成像系统）。３．检测在不同时间点对ｃａｃｏ２细胞运动能力的影响（损伤修复法、Ｔ