UBA2对结直肠癌增殖的影响及机制研究

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1、ｍ■ｍUBA2对结直肠癌增殖的影响及机制研究TheeffectofUBA2onproliferationofcolorectalcanceranditsmechanism作者姓名：何平专业名称：内科学研究方向：消化道肿瘤的病因及发病机制研究指导教师：孟祥伟教授学位类别：医学博士培养单位：白求恩第一医院论文答辩日期：2018年12月2日授予学位日期：年月日答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席：金宁一研究员军事医学科学院委员：李玉新教授东北师范大学孙连坤教授吉林大学基础医学院王桂侠教授吉林大学第一医院刘建国教授吉林大学第一医院未经本论文作者的书

2、面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结

3、果由本人承担。学位论文作者签名：〃０年月日中文摘要UBA2对结直肠癌增殖的影响及机制研究研究背景及意义：结直肠癌（Colorectalcancer,CRC）是全球最常见的恶性肿瘤之一，我国每年新增CRC37.6万例，且每年新发病例仍在持续增长。结直肠癌的发病机制尚不清楚，遗传学和流行病学等方面的研究认为结直肠癌的发生是遗传因素和环境因素共同作用的结果。遗传因素包括家族性息肉病、遗传性非息肉病、炎症性肠病。大量摄入脂肪、肉类和酒精会增加患结直肠癌的风险。而膳食纤维素及钙的摄入则会降低结直肠癌的患病风险。病因学的研究结果表明腺瘤样息肉是绝大

4、部分结直肠癌的癌前病变。手术治疗及放化疗为治疗结直肠癌的主要手段，但标准化疗失败后的晚期CRC患者，尤其是中国患者，能够选择的有效且可耐受的治疗方案非常有限。因此，阐明结直肠癌的发病机制，寻找有效的分子治疗靶标，进行靶向治疗已成为亟待解决的问题。泛素化修饰是一种最常见的翻译后修饰，是蛋白质在翻译后，通过将泛素分子结合到靶蛋白上，形成多聚泛素链，进而被26s蛋白酶体识别降解。SUMO(Smallubiquitin-likemodifier)是一类类泛素样分子，在结构上与泛素分子相似，也参与蛋白质翻译后修饰，但SUMO化修饰与泛素化修饰使靶蛋白具有截然

5、不同的命运。泛素化修饰介导靶蛋白的蛋白酶体降解，而SUMO化修饰具有可逆性的，参与靶蛋白的定位及功能调节，在细胞分裂、增殖、分化以及衰老等生命进程中发挥重要作用。已有研究表明，SUMO修饰参与肿瘤的发生、发展。UBA2(Ubiquitin-likemodifieractivatingenzyme2)作为SUMO化过程中E1激活酶的重要组分,在SUMO化过程中发挥重要作用。近年来研究发现UBA2在肺癌、肝癌及胃癌组织中表达增高，并且与肿瘤的病理分化程度、增殖、侵袭、转移及耐药性密切相关。然而，UBA2在结直肠癌的发生及发展过程中的作用研究较少。基于U

6、BA2在肺癌、肝癌及胃癌发病中的作用，我们假设UBA2参与了结直肠癌的形成及发展，抑制UBA2表达能有效抑制结直肠癌进展。为了验证上述假设，本研究首先观察UBA2mRNA和蛋白质在人结直肠癌组织中I的表达水平，并分析其表达水平与结直肠癌患者存活率的关系。进而，以RKO和HCT116细胞为研究对象，通过转染si(smallinterfering)-UBA2，探讨了UBA2对细胞增值的促进作用及机制；并在裸鼠皮下注射si-UBA2-RKO构建人结直肠癌移植瘤模型，观察UBA2在体内对结直肠癌发生、发展的影响。通过以上研究，揭示UBA2在人结直肠癌发生发

7、展中的作用及机制，为结直肠癌的分子靶向治疗提供了新靶点。方法：（1）收集2009-2010吉林大学白求恩第一医院手术切除237例结直肠癌及癌旁组织，釆用实时定量PCR（RealtimePCR）和免疫组织化学染色（Immunohistochemistry,IHC）的方法，检测UBA2在癌组织和癌旁组织中的表达；并比较UBA2表达水平与结直肠癌患者预后的关系。（2）体外实验部分：①采用慢病毒转染技术将UBA2特异性siRNA转染人结直肠癌细胞RKO和HCT116，通过g418抗性筛选获得稳定低表达UBA2细胞株；②采用RT-PCR和Westernblo

8、t（WB）方法检测稳定低表达UBA2的RKO和HCT116细胞中，UBA2的mRNA及蛋白表达水平；③采用MTT、克隆形成