人结直肠癌细胞中kiss-1基因信号通路的初步探索——mapk、nf-b信号通路的研究

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1、分类号：R735.3学校代码：10392学科专业代码：100210学号：2121003090硕士学位论文人结直肠癌细胞中Kiss-1基因信号通路的初步探索—MAPK、NF-B信号通路的研究PreliminaryExplorationonSignalTransductionPathwayofKiss-1GeneinHumanColorectalCancerCell—StudyonMAPK、NF-Bsignalpathways学位类型：医学硕士所在学院：第一临床医学院申请人姓名：苏小宝学科、专业：外科学（普外）导师：戴

2、起宝副教授陈绍勤副教授研究起止日期：2014年4月至2015年2月答辩委员会主席：应敏刚教授答辩日期：2015年6月2日二○一五年六月目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………3符号说明………………………………………………………………6引言……………………………………………………………………7材料和方法…………………………………...………………………10结果…………………………..………………………………………26讨论………………………………

3、……………..……………………41结论………………………………………………..…………………44参考文献……………………………………………..………………45综述……………………………………….………....………………49致谢……………………………………………….…………………58福建医科大学硕士学位论文人结直肠癌细胞中Kiss-1基因信号通路的初步探索—MAPK、NF-B信号通路的研究专业：外科学研究生：苏小宝导师：戴起宝副教授陈绍勤副教授摘要目的：1、探讨Kiss-1基因过表达对结直肠癌细胞增殖能力、侵袭和迁移

4、能力的影响。2、探讨Kiss-1基因在结直肠癌细胞中的相关信号传导通路。3、分析Kiss-1基因抑制结直肠癌转移能力的可能相关机制。方法：1、应用实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR）方法从结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、LOVO中筛选出Kiss-1基因mRNA的表达水平均相对较低者，备用。2、通过构建携带Kiss-1基因的慢病毒载体，并感染Kiss-1基因相对低表达细胞株，使其成为稳定过表达细胞株，并将原株细胞、空载体细胞、Kiss-1基因稳定过表达细胞

5、株分别分为：空白对照组（CON组）、阴性对照组（NC组）、过表达组（OE组）。3、采用CCK-8（CellCountingKit-8）和Transwell小室法分别检测Kiss-1基因转染前后细胞的增殖能力、侵袭及迁移能力的变化。4、应用Western-blot法检测三组细胞中MAPK信号通路的关键分子—丝裂原细胞外激酶（mitogenextracellularkiase，MEK）表达含量的变化以及下游效应蛋白肌球蛋白轻链（myosinregulatorylightchain，MLC）磷酸化水平的变化。5、应用West

6、ern-blot法检测三组细胞中NF-B信号通路中抑制性蛋白I-B以及下游效应蛋白基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9，MMP-9）表达含量1福建医科大学硕士学位论文的变化。结果：1、在SW480、SW620、HCT116、HT-29、LOVO人结直肠癌细胞株中，经qRT-PCR结果显示，在此5株结直肠癌细胞株中Kiss-1基因表达丰度均为中，但是Kiss-1基因在HCT116细胞株中表达量相对较少（P<0.01）有统计学意义。2、HCT116细胞通过慢病毒转染之后，报告基因增强型

7、绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)能够稳定表达，荧光率均>80%，Kiss-1基因转录产物mRNA及其蛋白Metastin的表达水平均明显升高，均具有统计学意义（P<0.05）。3、Kiss-1基因转染成功过表达后（OE组），CCK-8法检测，显示细胞增殖能力明显下降，有统计学意义（P<0.05）；Transwell小室结果表明，细胞的侵袭及迁移能力亦明显下降，均有统计学意义（P<0.05）。4、Westernblot检测结果显示，OE组细胞MEK表达含量下降，ML

8、C的磷酸化水平亦明显下降，与CON组NC组之间均有明显差异，具有统计学意义（P<0.05）。5、Westernblot检测结果显示，OE组细胞抑制性蛋白I-B的表达含量明显升高，而MMP-9的表达含量却明显降低，与CON组NC组之间均有明显差异，具有统计学意义（P<0.05）。结论：1、Kiss-1基因转染人结直肠癌HCT116