大鼠脑液压冲击伤后细胞色素c表达的实验研究

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1、大鼠脑液压冲击伤后细胞色素C表达的实验研究【摘要】目的为法医学上闭合性颅脑损伤的早期诊断和损伤时间推断提供依据。方法建立大鼠脑液压冲击模型。用免疫组化与图像分析技术分别检测伤后不同时间大鼠脑皮质、海马等部位细胞色素c(cytochromec，cytc)的表达。结果对照组大鼠脑内cytc有微量表达，伤后15分钟表达开始增强，伤后3小时达高峰，1天后开始减弱，7天后基本恢复正常。结论cytc表达的规律性可望为闭合性颅脑损伤的早期诊断及损伤时间推断提供依据。【关键词】闭合性颅脑损伤；cytc；免疫组织化学【中图分类号】d919．4；r361．2【文献标识码】

2、a【】1007—9297(2004)03—0219—03astudyoftheexpressionofcytcafterfluidpercussionbraininjuryinrats．chening，duxian—gang，xingyu，chenshi—edicineandforensicsciencesofsichuanuniversity，chengdu，610041，china；people’sprocuratorateofningde，fujian352100，china【abstract】objectivetosearchtheobject

3、iveevidenceforthediagnosisonearlybraininjuryandforestimatingthetimesincebraininjury．methodssomeratseafteri~ury．theex—pressionofcytcmunohistochemistry，andtheresultsageanalysissystem．resultsthereinutesafteri~ury，anditreachedatpeaksin3hoursafterinjury，anditbegantodecreasein1day，but

4、remainabovecontrollevelst．117days．conclusiontheregularityofcytcexpressionmightbeausefultargetfordiagnosisofearlybraininjury，anditalsocanbeusedinestimatingthetimesincebraininjury．【keymunohistochemistry颅脑损伤在法医病理学鉴定中十分常见。已有研醉，采用张永亮改进的dixon液压冲击装置[制造损伤究表明，脑损伤后脑血管，特别是脑内小动脉及小静脉模型。分别于伤后

5、15min、lh、3h、6h、12h、ld、4d、7d以发生痉挛收缩，脑血流量减少，引起脑部缺血缺氧卫j。4％多聚甲醛溶液进行主动脉灌注固定处死。在脑打击细胞色素c(cytochromec，cytc)是呼吸链中的必要成处尾侧3mm部位作冠状切面，常规石蜡包埋、切片。分之一，在线粒体复合物ⅲ、ⅳ之间传递电子。近来有正常对照组大鼠饲养1d后直接处死，手术对照组研究发现脑缺氧后神经元线粒体功能损伤并释放cyt大鼠仅行颅骨钻孑l，不做液压冲击，术后2h处死。两组c是神经元损害的中心环节，。目前关于cytc在闭动物取材及组织后处理同实验组。合性颅脑损伤的诊断与损

6、伤时间推断方面的研究报道三、主要试剂较少。本研究对大鼠脑部进行液压冲击造成闭合性颅兔抗鼠cytc多克隆抗体(武汉博士德生物工程有脑损伤，观12全文查看察伤后大鼠脑内cytc的表达情况，以期为限公司)。闭合性颅脑损伤的早期诊断及损伤时间推断提供依据。山羊抗兔sp试剂盒、dab显色剂(北京中山生物材料与方法技术有限公司)。一、实验动物分组四、染色健康雄性in、lh、3h、6h、12h、ld、4d、7d组，每组5只。二、动物模型的制备实验动物经10％水合氯醛按0．3g／kg体重腹腔麻he染色按常规操作进行，免疫组化染色按试剂说明书进行，以pbs代替一抗作阴性

7、对照。五、图像分析及统计学处理在皮质及海马区随机选取5个视野，用biomias图像分析仪测量cytc免疫阳性物面积及阳性细胞染色强度。测定数值用±s表示，用spss10．0forin，大鼠脑皮质和海马神经元cytc表达开始增强。伤后3h，大鼠脑皮质和海马神经元cytc表达达高峰，光镜下，可见神经元胞浆内有大片棕黄色免疫反应阳性物沉积(见图3、4)。免疫反应高表达持续到伤后1d，随后cytc表达逐渐降低，伤后7d，基本恢复至对照组水平。三、图像分析各组均进行了图像分析，结果见表1，2。表1大鼠脑皮质伤后不同时段cytc的表达table1expressio

8、nofcytcinthedifferentperiodsincerebralcortexofr