as2o3对胃癌细胞sgc7901-adr阿霉素耐药性逆转作用

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1、As2O3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用【关键词】胃癌SGC7901细胞株SGC7901/ADR细胞株多药耐药三氧化二砷　　0引言　　三氧化二砷（arsenictrioxide，As2O3）注射液主要用于治疗急性早幼粒白血病。最近研究发现，As2O3可引起白血病细胞K562/ADRPgp表达下调,使其多药耐药性部分逆转，具有增强肿瘤细胞化疗敏感性的作用[1]；而As2O3对实体瘤细胞株SGC7901/ADR是否具有相同作用还未见报道。本实验以SGC7901/ADR细胞为研究对象，通过MT

2、T法、流式细胞仪和免疫组织化学等方法研究As2O3对SGC7901/ADR细胞的逆转作用及可能的机制，为临床应用提供理论依据。　　1材料与方法　　　　1.1材料　　1.1.1药物与试剂As2O3（即亚砷酸注射液，哈尔滨伊达制药有限公司产品,批准文号：国药准字H：19990191；批号：021031），MTT（美国Sigma公司产品），盐酸阿霉素（ADM）（浙江海正药业有限公司产品，批准文号：国药准字H33021980，批号：021005），鼠抗人Pgp、GSTπ单克隆抗体及即用型第二代免疫组化Elivisi

3、onTMplus广谱试剂盒（福州Maixin生物工程公司产品）。　　1.1.2细胞人胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR,由第四军医大学西京医院全军消化内科研究所惠赠。　　1.2方法　　1.2.1As2O3细胞毒性测定取对数生长期的细胞接种于96孔板中，加入不同浓度的As2O3(3.2～0.1μmol/L)，参照文献[2]说明进行，每个实验重复3次,选取细胞存活率>90％的药物浓度为该药的非细胞毒性浓度。　　1.2.2MTT法测定细胞药物敏感性实验分3组进行，按前述方法培养细胞48h，测定A4

4、90nm值。分组如下：（1）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）；（2）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）+As2O3（0.4μmol/L，终浓度）；（3）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）+As2O3（0.8μmol/L，终浓度）。　　1.2.3细胞内ADM荧光强度测定实验分3组进行，按前述方法培养细胞24h，按照文献[3]采用流式细胞仪测定细胞

5、内ADM荧光强度。分组如下:（1）加入ADM（5mg/L，终浓度）；（2）加入As2O3（0.4μmol/L，终浓度）和ADM（5mg/L，终浓度）；（3）加入As2O3（0.8μmol/L，终浓度）和ADM（5mg/L，终浓度）。　　1.2.4用免疫组织化学方法测定细胞Pgp、GSTπ表达实验分3组进行：（1）SGC7901；（2）SGC7901/ADR；（3）SGC7901/ADR+As2O3（0.8μmol/L，终浓度）。调整细胞数为1×105/ml滴于处理过的载玻片上，培养4h。按Elivision

6、二步法免疫组织化学试剂盒说明进行。　　1.2.5统计方法采用SPSS10.0统计软件中的t检验作统计学分析。　　2.2MTT法测定细胞药物敏感性　　0.8μmol/L和0.4μmol/LAs2O3与ADM同时作用，可降低耐药细胞的存活率，增加耐药细胞对ADM的敏感性，逆转倍数分别为2.11和1.58（P<0.01）。与0.4μmol/LAs2O3相比，0.8μmol/L的As2O3能显著增加耐药细胞对ADM的敏感性（P<0.05）；而As2O3对敏感细胞却无增敏作用（P>0.05），见表1。　

7、　表1As2O3对SGC7901/ADR细胞ADM耐药性的逆转作用（略）　　★:vsSGC7901;☆:vsSGC7901/ADR　　2.3As2O3对细胞内ADM浓度的影响　　通过流式细胞仪检测细胞内ADM荧光强度，分析As2O3对SGC7901/ADR细胞内ADM浓度的影响。由表2可见,SGC7901/ADR细胞内ADM荧光强度比SGC7901低4.65倍(P<0.05)；加入0.4μmol/LAs2O3后，SGC7901/ADR细胞内荧光强度无显著性增加(P>0.05)；加入0.8μmol/L

8、As2O3后，耐药细胞内ADM的荧光强度明显增加（P<0.01），增加倍数为1.32倍。　　2.4As2O3对SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达的影响　　耐药细胞的Pgp、GSTπ表达明显高于敏感细胞（P<0.01），加入As2O3后，耐药细胞Pgp、GSTπ表达明显降低（P<0.05），见表3。　　表2As2O3对SGC7901/ADR细胞内