三氧化二砷对胃癌细胞sgc7901-adr阿霉素耐药性逆转作用的研究论文

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1、三氧化二砷对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用的研究论文【摘要】目的探讨三氧化二砷（As2O3）对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素（ADM）耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞，用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性，用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P0.01)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达，提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓

2、度，增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达，增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。【关键词】胃癌SGC7901细胞株SGC7901/ADR细胞株多药耐三氧化二砷0引言三氧化二砷（arsenictrioxide，As2O3）注射液主要用于治疗急性早幼粒白血病。最近研究发现，As2O3可引起白血病细胞K562/ADRPgp表达下调,使其多药耐药性部分逆转.freela公司产品），盐酸阿霉素（ADM）（浙江海正药业有限公司产品，批准文号：国药准字H33021980，批号：021005），

3、鼠抗人Pgp、GSTπ单克隆抗体及即用型第二代免疫组化ElivisionTMplus广谱试剂盒（福州Maixin生物工程公司产品）。1.1.2细胞人胃癌细胞株SGC7901和SGC7901/ADR,由第四军医大学西京医院全军消化内科研究所惠赠。1.2方法1.2.1As2O3细胞毒性测定取对数生长期的细胞接种于96孔板中，加入不同浓度的As2O3(3.2～0.1μmol/L)，参照文献2说明进行，每个实验重复3次,选取细胞存活率90％的药物浓度为该药的非细胞毒性浓度。1.2.2MTT法测定细胞药物敏感性实验分3组进行，按前述方法培养细胞48h，测定A490nm值。分组如下：（1

4、）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）；（2）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）+As2O3（0.4μmol/L，终浓度）；（3）SGC7901（或SGC7901/ADR）细胞+ADM（0.01～100mg/L，终浓度）+As2O3（0.8μmol/L，终浓度）。1.2.3细胞内ADM荧光强度测定实验分3组进行，按前述方法培养细胞24h，按照文献3采用流式细胞仪测定细胞内ADM荧光强度。分组如下:（1）加入ADM（5mg/L，终浓度）；（2）加入As2O3（0.4μmol

5、/L，终浓度）和ADM（5mg/L，终浓度）；（3）加入As2O3（0.8μmol/L，终浓度）和ADM（5mg/L，终浓度）。1.2.4用免疫组织化学方法测定细胞Pgp、GSTπ表达实验分3组进行：（1）SGC7901；（2）SGC7901/ADR；（3）SGC7901/ADR+As2O3（0.8μmol/L，终浓度）。调整细胞数为1×105/ml滴于处理过的载玻片上，培养4h。按Elivision二步法免疫组织化学试剂盒说明进行。1.2.5统计方法采用SPSS10.0统计软件中的t检验作统计学分析。2结果2.1As2O3的细胞毒作用As2O3在0.8μmol/L和0.4μ

6、mol/L时，耐药细胞SGC7901/ADR的存活率分别为93.92％和95.84％；相同剂量的As2O3对敏感细胞SGC7901也无明显细胞毒性。故将0.8μmol/L和0.4μmol/L作为非细胞毒性药物浓度。2.2MTT法测定细胞药物敏感性0.8μmol/L和0.4μmol/LAs2O3与ADM同时作用，可降低耐药细胞的存活率，增加耐药细胞对ADM的敏感性，逆转倍数分别为2.11和1.58（P0.01）。与0.4μmol/LAs2O3相比，0.8μmol/L的As2O3能显著增加耐药细胞对ADM的敏感性（P0.05）；而As2O3对敏感细胞却无增敏作用（P0.05），见表1

7、。表1As2O3对SGC7901/ADR细胞ADM耐药性的逆转作用（略）★:vsSGC7901;☆:vsSGC7901/ADR2.3As2O3对细胞内ADM浓度的影响通过流式细胞仪检测细胞内ADM荧光强度，分析As2O3对SGC7901/ADR细胞内ADM浓度的影响。由表2可见,SGC7901/ADR细胞内ADM荧光强度比SGC7901低0.92倍(P0.05)；加入0.4μmol/LAs2O3后，SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性增加0.19倍，但无显著性增加(P0.0