牛奶中黄曲霉毒素m1常见检测方法比较

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1、牛奶中黄曲霉毒素M1常见检测方法比较　　摘要：黄曲霉毒素M1（AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1（AFB1）后在体内经羟基化形成的代谢产物，具有极强的毒性，存在于乳中。介绍了黄曲霉毒素M1（AFM1）的危害以及牛奶中黄曲霉毒素M1的薄层色谱（TLC）检测法、高效液相色谱（HPLC）检测法和快速检测法，并比较了各种方法的优缺点和适用范围。关键词：黄曲霉毒素M1；危害；检测方法；比较中图分类号：TS252.7文献标识码：B文章编号：1007-273X（2013）06-0078-03黄曲霉毒素（Aflatoxin，AF）主要是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物，之所以广受重视是因为它是人类癌症的一

2、个重要的致癌源。至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见。在AF中，已知毒性大小顺序为AFB1>AFM1>AFG1>AFB2>AFG。黄曲霉毒素M1（AflatoxinM1，AFM1）是动物摄入黄曲霉毒素B1（AflatoxinB1，AFB1）后在体内经羟基化形成的代谢产物，毒性仅次于AFB1，WHO将其列为ⅡB类致癌物。AFM1主要存在于动物的乳、肾脏、肝脏、蛋、肉和尿中，其中以乳中最为常见。把发霉的谷物作为饲料，其中的黄曲霉毒素在2410h之后就能进入奶中。王蕾指出黄曲霉毒素被动物食用后，一部分会蓄积在动物的体内，另外一部分则会转化到乳汁和尿

3、液中，转化率一般为3.45%～11.39%[1]，排出AFM1的量为AFB1摄入量的1%～3%[2]。1黄曲霉毒素M1的基本性质及危害黄曲霉毒素基本结构由一个二呋喃环和一个氧杂萘邻酮组成，前者为其毒性结构，后者可能与其致癌作用有关。黄曲霉毒素M1一旦产生便很难消除，因为它对光、热和酸都比较稳定，熔点（裂解温度）在299℃。牛奶常见的3种消毒方法都对它无可奈何。黄曲霉毒素M1进入人或动物体内后，除抑制DNA、RNA合成外，也抑制肝脏蛋白质合成，导致人体中毒。其危害主要表现在3个方面：损害组织器官；致癌、致畸、致突变，引发动物及人类的肝癌、肾癌和胃癌等[3-5]；抑制免疫机能。其毒性是氰化钾

4、的10倍，砒霜的68倍，主要危害的部位在肝脏。2牛奶中AFM1的限量牛奶中AFM1限量取决于科学、社会和经济方面的诸多因素，这些因素相互影响、制约，综合地决定牛奶中AFM1限量值。目前，世界各国对食品中AFM1的含量都制定出了严格的限量标准。牛奶中AFM1限量值采用0.0510μg/kg的国家最多，为34个，其中绝大部分国家是欧盟成员国以及与欧盟有贸易的非洲、亚洲、拉丁美洲部分国家，欧盟对婴幼儿配方食品，包括婴幼儿配方牛奶限量0.025μg/kg。另一个限量值为0.5μg/kg，有22个国家，包括美国、中国以及若干亚洲和欧洲国家。还有4个国家分别采用15、5、0.2μg/kg以及不得检出

5、[6]。一些主要国家牛奶中AFM1的限量标准见表1。3牛奶中AFM1的检测方法3.1薄层层析法（TLC法）TLC法是测定牛奶中黄曲霉毒素的经典方法，是通过肉眼比较定性或者半定量的检测方法。其原理是将样品经提取、浓缩、薄层分离后，AFM1在紫外光（波长365nm）下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的最低检出量与标准溶液的荧光强度相比较来测定含量。GB5009.24～2010食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定、ISO14674：2005（IDF190：2005）牛奶和奶粉黄曲霉毒素M1的测定、AOAC974.17乳制品中黄曲霉毒素M1的测定和AOAC980.21牛奶和奶酪黄曲霉毒素M1

6、的测定就是采用的TLC法[7-10]。TLC法的优点在于不依赖特殊仪器，成本低，易于普及，双向展开避免了杂质干扰，被用于大规模的筛查研究中。虽然TLC法是牛奶中黄曲霉毒素M110测定的官方规定方法之一，但是随着高效液相色谱和液相色谱-质谱连用技术的发展，TLC的缺点也逐渐显现：对样品处理繁琐，过程复杂，且提取和净化效果不够理想，双向展开增加了操作步骤和时间，对人和环境污染系数较大。3.2高效液相色谱法（HPLC法）HPLC法是利用免疫亲和柱或C18柱将样品中的AFM1萃取、净化、浓缩、分离，再通过HPLC串联不同检测器进行检测。免疫亲和柱是利用抗原抗体的特异性吸附特性，亲和柱只能特异性、

7、选择性地吸附AF，而其他杂质则顺利通过柱子，然后再利用洗脱液将AF洗脱下来。该方法大大简化了样品的前处理过程，同时利用高效液相色谱进行定量和定性，可以同时测出AF的总量和AFM1、AFB1、AFB2、AFG1、AFG2各自含量。我国GB/T23212～2008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2的测定和GB5413.37～2010乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定（第一法免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法、第二法