抗生素微生物检定法.doc

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1、抗生素微生物检定法 本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。  管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。（一） 基本设备、用具、试验材料及标准品1.      基本设备（1）     抗生素

2、效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。（2）     超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。（3）     抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。2.      用具（1）      玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。新购的双碟应按上述要求进行检查。检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟

3、底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160℃干热灭菌2小时后备用。（2）      陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。（3）      不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。（4）      小钢管放置器：四孔和六孔各一台。（5）      游标卡尺：精密度0.02mm。（6）      滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。3.      试验材料（1）     培养基及其制备方法以下培养基、缓冲液制备

4、时，均以115℃灭菌30分钟。培养基   Ⅰ胨          5g        磷酸氢二钾    3g        水       1000ml牛肉浸出粉  3g        琼脂      15~20g    除琼脂外，混合上述成分，调节PH使比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过（用纸浆减压滤过或纱布棉花滤过），调节PH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6，分装，灭菌。    培养基   Ⅱ胨         6g         酵母浸出粉    6g        琼脂     15~20g牛肉浸出粉  1.5g

5、       葡萄糖        1g        水        1000ml除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6，分装，灭菌。培养基   Ⅲ胨       5g            氯化钠      3.5g          葡萄糖       1g牛肉浸出粉   1.5g      磷酸氢二钾     3.68g       水     1000ml酵母浸出粉   3g        磷酸二氢钾     

6、1.32g除葡萄糖外，混合上述成分，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.0~7.2，分装，灭菌。培养基   Ⅳ胨         3g          酵母浸出粉        3g         水       1000ml葡萄糖     1g          琼脂            15~20g除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使其比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为6.5~6.6，分装，灭菌，趁热斜放使凝固成斜面。培养基   Ⅴ胨       

7、    6g       酵母浸出粉         2g        琼脂       15~20g牛肉浸出粉   2g       葡萄糖             3g        水         1000ml除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使其比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.8~8.0，分装，灭菌。培养基   Ⅵ蛋白胨      7.5g       牛肉浸出粉    1.0g       葡萄糖     10.0g酵母膏      2.0g       氯化钠

8、        5.0g       水         1000