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《抗生素微生物测定法操作规程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、抗生素微生物测定法操作规程1.目的：建立抗生素微生物测定操作规程，便于操作者止确进行抗生素效价测定。2.适用范围：适用于抗生素的效价测定。3.责任人：QC质量检验员4.正文：4.1仪器设备与试液：4.1.1仪器设备4.1.1.1操作室：应在抗生素检定室中进行。4.1.1.2超净工作台：(用于菌种的接种或传代)4.1.1.3恒温培养箱：隔板上可备有带孔的玻璃板并垫平。4.1.1.4电热鼓风干燥箱4.1.1.5电热压力蒸汽灭菌器4.1.1.6电热恒温水浴锅4.1.1.7天平：分析天平，感量0.lmg4.1.1.8
2、游标卡尺:精度0.05mm,长度125mm。4.1.1.9双碟：为硕质玻璃培养平皿，内径90mm,高16〜17mm,碟底厚薄均匀水平，无气泡。4.1.1.10陶瓦盖：内径约130mm,外径108mm,平坦，吸水性强。4.1.1.11钢管：内径(6.0±0.1)mm或(7.8±0.1),高(10.0±0.1)mm,每套钢管重量茅异不超过±0.05g,内外壁及两端面光滑平坦，管壁厚薄一致。4.1.1.12钢管放置器：置于半无菌操作间内，应保持清洁，防止抗生素污染。可定期按钢管放置器操作规程进行消毒。4.1.1.1
3、3毛细滴管:用玻璃管拉制,管口光滑。4.1.1.14称量瓶：25ml>50ml>100ml>200ml>250ml4.1.1.15刻度吸管：lml>2nd、5ml、10ml>20ml4.1.1.16移液管2ml、5ml、10ml、20ml4.1.1.17其他玻璃仪器4.1.2试液：41.2.1缓冲液、磷酸盐缓冲液(pH6.0)、磷酸盐缓冲液(pH7.8)4.1.2.2生理盐水4.1.2.30.1%新洁尔灭4.1.2.45%石炭酸4.1.2.575%乙醇溶液(配制酒精棉球用)4.1.2.63%煤酚皂溶液第1页共
4、8页4.1.3培养基：培养基I、培养基II、培养基VI4.1.4试验用菌种：检定用标准菌种，由中国兽约监察所提供，为冷冻干燥菌种，其复苏、接种与保存均参照《菌种复苏操作规程》、《菌种接种操作规程》。4.1.4.1枯草芽抱杆菌（63501）4.1.4.2短小芽砲杆菌（63202）4.1.4.3藤黄微球菌（28001）4.2试验前准备：4.2.1试液配制：4.2.1.1缓冲液：制备缓冲液的试剂应为分析纯。4.2.1.1.1磷酸盐缓冲液（pH6.0）：取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加水使成1000ml,滤过，分
5、装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌30分钟备用。4.2.1.1.2磷酸盐缓冲液（pH7.8）取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使成1000ml,滤过。分装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌30分钟备用。4.2.1.2灭菌生理盐水：取氯化钠9g,加水使成1000ml,滤过。分装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌
6、30分钟备用。4.2.1.30.1%新洁尔灭：配制方法参照《微生物实验试剂制备操作规程》。4.2.1.45%石炭酸：配制方法参照《微生物实验试剂制备操作规程》。4.2.1.575%乙醇溶液：（配制酒精棉球用）：配制方法参照《微生物实验试剂制备操作规程》。4.2.1.63%煤酚皂溶液：配制方法参照《微生物实验试剂制备操作规程》。4.2.2培养基的准备：4.2.2.1培养基I:参照《培养基制备操作规程》制备，分装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌30分
7、钟备用。4.2.2.2培养基II:参照《培养基制备操作规程》制备，分装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌30分钟备用。4.2.2.3培养基VI：参照《培养基制备操作规程》制备，分装于500ml三角瓶中（分装时不宜超过容器的2/3）,置于电热压力蒸汽灭菌器，经121°C蒸汽灭菌30分钟备用。4.2.3菌悬液的制备：4.2.3.1枯草芽抱杆菌（63501）悬液：取枯草芽他杆菌工作用菌种普通斜面培养物加灭菌水1〜2ml将菌苔洗下，制成悬液，用灭菌吸管将此
8、悬液接种到盛有普通琼脂培养基的扁培养瓶内，均匀摊布，在35〜37°C培养7日，取菌苔少许涂片，革兰氏染色镜检，应有芽抱85%以上，用灭菌水将芽他洗下，制成芽他悬液，合并至灭菌大试管内，在70〜75°C水浴内加热30分钟将菌体杀死，待冷后放冰箱贮藏为浓菌液。日常用菌悬液：取上述浓菌液，用灭菌水1:3稀释至灭菌试管中，冰箱保存备用。4.2.3.2短小芽他杆菌（63202）悬液：取短小芽砲杆菌工作用菌种普
