抗生素微生物测定法课件.ppt

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1、抗生素微生物测定法威海市药品检验所董丽萍概述（1）抗生素定义抗生素是生物在其生命活动过程中产生的（或用化学、生物或生化方法所衍生的），在低微浓度下能选择性地抑制他种生物机能的化学物质。（2）抗生素分类根据其化学结构分为8类：β-内酰胺类抗生素：包括青霉素类、头孢菌素类、头霉菌素类、克拉维酸等。氨基糖苷类抗生素：包括链霉素、卡那霉素、庆大霉素和新霉素等。大环内酯类抗生素：包括红霉素、麦迪霉素、柱晶白霉素等。四环类抗生素：包括四环素、土霉素、金霉素等。多烯类抗生素：包括曲古霉素、制霉菌素、两性霉素B等。多

2、肽类抗生素：包括多粘菌素、放线菌素、博来霉素等。环桥类抗生素：包括利福霉素及其衍生物。蒽环类抗生素：包括柔毛霉素（正定霉素）、色霉素、阿霉素、橄榄霉素等。检定方法的分类随着科技的的发展、分离分析技术的提高，抗生素的分子结构及成分更加清楚，所以很多抗生素品种都改为高效液相法或其他仪器测定法，既准确又快速。但对一些组分复杂的复合抗生素品种，目前仍应用此法。优点：（1）微生物检定法可直观、特异地反应出抗生素药品的抗菌活性，显示临床的特点；（2）多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确

3、表征组分组成、含量和活性的关系；（3）许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的化学分析方法表征其活性；（4）同时微生物法所需仪器设备简单，成本低。一般分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。目前，比浊法和琼脂扩散法被列为抗生素微生物检定方法，收载于药典中。（一）稀释法：使用液体培养基将抗生素稀释为多种浓度，再各加入等量的试验菌菌液，在37℃、一定时间培养，以何种稀释度抑制细菌生长作为测定终点再以同样处理的标准抗生素重点作比较，即可求得抗生素的效价，但由于此法终点的判别较难，所得结果是一种范围而不是绝对值，因此

4、该法已不用于效价测定，而用于研究新药与临床药敏试验、研究等。（二）比浊法：在原理及操作上大致与稀释法相似。只是重点根据试验细菌生长情况即浑浊程度采用分光光度法测定吸光度来求出供试品的效价。该方法快速、准确，不受扩散因素的影响，自动化程度高，检测过程直观。《中国药典》从2005年版开始收载浊度法，当时只收载硫酸庆大霉素一个品种。2010年版新增21个品种增加到22个品种。（三）琼脂扩散法：用不同的试验设计方法将供试品和标准品接触与固体培养基表面，经培养后，抗生素向培养基中扩散，抑制细菌繁殖而形成透明的抑

5、菌圈。其中的管碟法是最常用的方法，可分为：一剂量法、二剂量法及三剂量法。主要又以二剂量法为主。管碟法原理：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成正比抑菌圈的形成将不锈钢小管(俗称为牛津杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上，将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子随溶剂向培养基内呈球面状放射状扩散。同时将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱中，琼脂培养基中的试

6、验菌开始生长。抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开小钢管的距离增大而降低，离小钢管愈远，琼脂培养基中抗生素分子愈少，相应的抗生素浓度愈低。当抗生素分子扩散到一定时间，在小钢管周围形成一个能有效的抑制试验菌生长的范围，也就是通常所说的抑菌圈。抗生素溶液的浓度不同，抑菌圈的大小亦不同(图)。抗生素的效价和单位一、抗生素的效价和单位抗生素的含量用效价和单位表示。该词有时不加区别统称为效价单位。效价（potency）：指检品的实际单位数与其标示量的比值。常表示为效价的百分数。效价是从比较检品与标准品的生物活

7、性而得。在不同的微生物效价测定中，效价计算的公式见后述。单位（unit,u）单位是衡量抗生素有效成分的具体尺度。各种抗生素的单位含义不同，在习惯上根据它们的实际发展情况而定，抗生素效价单位的具体表示方法见后述。标准品与国际单位(internationalunit,iu)抗生素微生物测定用的标准品，除国内的新品种外，凡已制备国际标准品的品种，在制备国家标准品时，均与国际标准品比较而定出效价。抗生素的效价单位的表示方法１、质量单位以抗生素的生物活性部分质量作单位，１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００单

8、位。２、类似质量单位以特定的纯粹抗生素盐类的质量作为１单位。如纯粹金霉素盐酸盐及四环素盐酸盐（包括无生物活性的盐酸根在内）１微克（ｕｇ）＝１单位，１毫克＝１０００个单位。这是根据国际使用习惯而来的。３、质量折算单位以特定的纯抗生素盐的质量为单位而加以折算。４、特定单位以特定的抗生素样品的某一质量定为一单位。标准品的称量→标准品的稀释→标准品溶液供试品的称量→供试品的稀释→供试品溶液缓冲液的制备培养基的制备→底层20ml─→菌层5ml─→┌───平板的制备