抗生素微生物检定法

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1、德信诚培训网抗生素微生物检定法一、目的：阐述抗生素微生物的检定法。二、适用范围：适用于抗生素微生物检定法。三、责任者：品控部。四、正文：1简述抗生素微生物检定法，依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。后二者被列为抗生素微生物检定的国际通用方法。中国兽药典采用管碟琼脂扩散法。抗生素管碟检定法是利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈线性关系，通过比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。抗生素效价以“单位（u）”或“微克

2、（ug）”表示。2仪器与用具2.1操作室光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开；一部分为一般操作间，一部分为半无菌操作间。半无菌操作间，设有紫外线灯达到空气消毒。应装有空调设备，控制室温在20-25℃。操作台可用稳固的水泥台，台面用玻璃板垫平，用水平仪校准，保持水平。室内注意抗生素的污染。2.2双碟为硬质玻璃或塑料培养平皿，内径约90mm,高16-17mm,碟底厚薄均匀水平,无气泡.碟底平度检查,可将双碟放在水平台上,下垫一张白纸,碟内加2-3ml,再滴加蓝墨水,观察蓝色深汪是否一致.用过的双碟经高压灭菌倒出培养基后,置玻璃仪器专用洗液或其他清洗液中浸泡过夜,冲洗,沥干,置150-160℃

3、干热灭菌2小时或高压121℃蒸气灭菌30分钟，备用。2.3陶瓦盖内径约为103mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期干燥、清洗。2.4钢管内径（6.0±0.1）mm,高(10.0±0.1)mm，外径（8.0±0.1）或（7.8±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g更多免费资料下载请进：http://www.55top.com好好学习社区德信诚培训网，内外壁及两端面光洁平坦，管壁厚薄一致。每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内，浸泡2小时以上，进行灭菌后再行洗涤，先用水洗涤，超声波超声30分钟或用沾有去污粉的纱布条擦内外壁，用水冲洗，淋干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的溶

4、器内，在150-160℃干热灭菌2小时备用。2.5钢管放置器置于半无菌操作间内，有6孔和4孔两种，钢管下落时应垂直平稳、位置正确，双碟升降平稳。应保持清洁，防止抗生素污染。可定期用75%乙醇棉擦试，并用乙醇棉炎焰烧小孔。置钢管的玻璃管定期干烤灭菌。2.6恒温培养箱隔水式为宜，35-37℃及24-26℃，隔板上可备有带孔的玻璃板并垫平。2.7灭菌刻度吸管吸取菌液及培养基用。试验用后应立即置5%石炭酸或者0.2%新洁尔灭溶液中消毒后再按玻璃容器常规洗涤。吸口处塞入脱棉（应松动，透气），置适宜容器中，120℃以上干热灭菌2小时或121℃蒸气灭菌30分钟，烘干备用。2.8玻璃容器包括滴定管、移液管

5、、刻度吸管、容量瓶等，按“玻璃器皿检定规程”进行标定，要符合一等品规定，每次应用前用清洁液浸泡，水冲洗、蒸馏水冲洗3次，淋干。更多免费资料下载请进：http://www.55top.com好好学习社区德信诚培训网2.9称量瓶具塞，重量在10g以下。用毕先用水冲洗、淋干，置清洁液浸泡2小时以上，水先、蒸馏水冲洗3次，置洁净的大平皿中，在120℃干热3小时，待冷至70-60℃时，取出置于干燥器中备用。2.10毛细滴管用玻璃管拉制，管口光滑。应用前清洁液浸泡、水冲洗、蒸馏水冲洗3次，置适宜容器中，在120℃干燥3小时备用。2.11天平分析天平，感量0.1mg。2.12抑菌圈直径（面积）测量仪。2

6、.12.1可用CHB型抑菌圈面积测量仪及适当的测试仪。仪器必须按抑菌圈测量仪检验规程检验，符合规定者方能应用。2.12.2游标卡尺精度0.05mm，长度125mm。2.13超净工作台用于菌种的接各或传代。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。3试液3.1灭菌缓冲液制备缓冲液的试剂应为分析纯，配制后的缓冲液应澄明，分装于玻璃容器内，经121℃蒸气灭菌30分钟备用。3.1.1磷酸盐缓冲液（PH6.0）取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g，加水使成1000ml，滤过。3.1.2磷酸盐缓冲液（PH7.0）取磷酸氢二钾9.39g与磷酸二氢钾3.5g，加水使成1000ml，滤过。3.1.3磷酸盐缓冲液（P

7、H7.8）取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml，滤过。3.1.4磷酸盐缓冲液（PH0.5）取磷酸氢二钾35g，加氢氧化钾液（10mol/L）2ml，加水使成1000ml，滤过。4培养基培养基中原料的质量对抑菌圈边缘清晰度及试验结果的精确度影响较大，因此应对原材料进行预试验，挑选适当的品牌使用。制成的培养基不应有沉淀，如产生沉淀，可在配制培养基后，置115℃，20分钟溶化，趁热用纸浆减压或适宜