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时间:2020-05-19
《神经干细胞定向分化为多巴胺能神经元过程中Mash1及Hes1基因的表达.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、解剖学研究2015年第37卷第3期AnatRes,2015.V01.37.N0.3167·论著·神经干细胞定向分化为多巴胺能神经元过程中Mashl及Hesl基因的表达张君度,龙大宏,陈艳,刘菲菲,龙静怡(广州医科大学人体解剖学教研室,广东广州510182)【摘要】目的建立神经干细胞(NSCs)分化为多巴胺能神经元的体外模型,并进一步研究此分化过程中Mashl及Hesl基因的表达变化。方法无菌条件下取孕14—16d胎鼠端脑进行NSCs体外培养。将NSCs进行Nestin免疫荧光检测,对照组和实验组(GDNF+IL.1et联合组)诱导2周后进行B—tubulinⅢ和TH免疫荧
2、光染色,计算各组阳性细胞率,荧光定量PCR技术检测P4代NSCs分化1周和2周时Mash1及Hesl基因的表达变化。结果免疫荧光检测结果显示,NSCs的Nestin阳性细胞率为(93.04+3.55)%,诱导分化2周后对照组、实验组p.tubulin111阳性细胞率分别为(12.65+1.58)%和(33.95~2.97)%,两组间比较差异存在统计学意义(P<0.05)。对照组、实验组TH阳性细胞率分别为(1.46~0.41)%、(15.51~1.94)%,差异存在统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,NSCs诱导分化后,Mashl基因表达较未分化状态时升高
3、,各组间比较差异存在统计学意义,实验组高于对照组(P<0.05),分化2周高于1周(P<0.01);Hesl基因于分化后表达降低,对照组与对实验组之间以及分化1周与2周之间比较差异没有统计学意义(P>0.05)。结论GDNF和IL.1联合作用能够诱导NSCs定向分化为多巴胺能神经元;Mashl与Hes1基因可能参与NSCs分化为多巴胺能神经元的过程。【关键词】神经干细胞;分化;多巴胺能神经元;Mashl;HeslTheexpressionofMashlandHeslduringinduceneuralstemcellsdiferentiatingintodopaminer
4、gicneuronsZHANGJun—du,LONGDa-hong,CHENYon,LIUFei-fei.LONGJing-yi,DepartmentofAnatomyofGuangzhouMedwalUniversity,Guangzhou510182,ChinaCorrespondingauthor:LONGDa-hong,Email:2856478507@qq.com【Abstract】ObjectiveTobuildtheinvitromodeldofNSCsdiferentiateintodopaminegicneurons,andfurtherstudythe
5、expressionofMash1andHeslinthisprocess.MethodsSeparatedthetelencephalonofratembryosinsterileconditionandcul—turedinvitro,takeNSCsstainedbyNestinimmunofluorescenceassay,dividedintocon=groupandexp-group(GDNF+IL-let)andinducedintodopaminegicneurons,after2weeksstainedbyp-tubulinⅢandTH,andcount
6、edtherateofpositivecellsofeachgroup.q-PCRcheckedtheexpressionofMashlandHeslinNSCsandduringdiferentiatedintodopaminegicneurons.ResultsIFshowedthattherateofNestinpositivecellswas(93.04~3.55)%,Therewerenostatisticaldiferencebetweenthetwocomparison(P>0.05).Afterdiferamiated2weeks,therateof13-
7、tubulinⅢpositivecellswere:I)4,con—group[(12.65~1.58)%],exp—group[(33.95~2.97)%],respectively,Therewerestatisticaldiferencebetweenthetwocomparison(P<0.05);therateofTHpositivecellwere:P4,con—group[(10-41)%],exp—group[(15.51~1.94)%],Therewerestatisticaldiferencebetween
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