过表达nurr1基因的小胶质细胞对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响

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1、专业学位硕±学位论文号．已：Ｒ６５１Ｒ７４２单位代码：１０６７８分类学号：２０１２５６７密级：見略（Ｉ种太常硕±学位论文过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶振细胞对神经干细胞向多己胺能神经元分化的影响院诱一临床医学院）、所昆明医科大学第硏究生姓名蒋宏国学科专业外科学（神经外科）、学位类型专业学位指导教师杨智勇教授二〇—五年五月尾Ａｉｌ种ｆ、常硕±学位论文过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶质细胞对神经干细胞向多臣胺能神经元分化的影响硏究生姓名蒋宏国

2、学科、专业外科学（神经外科）申请学位类型专业学位指导教师杨智勇教授指导小组教师邓兴力副教授完成日期二〇—五年五月尾巧＆种ｆ、嗦研究生学位论文研巧撰写声明本人郑重声明：本学位论文是我本人在导师指导下，独立进行学位课题研巧所取得的研巧成果ｉ。论文中除特别加ｌｉｌ标注和致谢的地方外，不包含他人或其他机构己经发表或撰写过的研究成果。对本研究和论文做过贡献的同道我均在论文中作了明确的说明并表明谢意。该学位论文资料若有不实么处，本人愿承担一切相关责任。＿心＿论文化者（签名）

3、■ＣＰＷＸ年广月寺０冕跨６钟Ａ掌研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解昆明医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可公布论文的全部或部分内容（确属保密内容己注明，并在解密后遵守此规定）；学校可采用影印、缩印或其他手段保存本学位论文。＇学位论文作者（签名）指导獅（签名）＇Ｐ。辟。。尽年ｒ月＂本人及导师同意将学位论文提交至清华大学中国学术期刊（光盘版）电＂子杂志社进行电子和网络出版，，并编

4、入ＣＮＫＩ系列数据库传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕古学位论文全文数据库出版章程》规定孚受相关权益。学位论文作者（签名）：指导教师（签名）；。■。策年曲苗Ｊ：年Ｊ月曰目录中文摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ４符号说明７２材料与试剂１一第部分Ｎｕｒｒｌ基因对小胶质细胞活化状态的影响１８－材料和方法１８二誠２５Ｈ论３０第二部分过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶质细胞对神经干细胞向多己胺能神经元分化的影响３２—材料和施３２二结果３８

5、Ｈ５４Ｓ论５８参考文献５９综述６４论文发表情况７３Ｅ＾７４昆明医科大学硕±研究生学位论文过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶质细胞对神经干细胞向多田胺能神经元分化的影响中文摘要硕ｉ研巧生：蒋宏国导师：杨智勇教授昆明医科大学第一附属医院神经外科目的：探讨Ｎｕｒｒｌ基因对小胶质细胞活化状态的影响及过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶质细胞对神经干细胞向多己胺能神经元分化的影响，并初步探讨其可能相关的作用机制，为帕金森病的神经干细胞移植治疗提供新的思路和方法

6、，使治疗效果得到改善。方法；￣１．解剖分离新生（０２ｄ）ＳＤ大鼠大脑皮质，经膜酶消化及机械吹打制成单细施悬液？，接种于含有１０％胎牛血清的培养基中培养７１０ｄ，经机械振摇和差速，后贴壁嵌纯化小胶质细胞，并进行ＣＤＨｂ／ｃ免疫细胞化学鉴定。２．将全基因合成的大鼠Ｎｕｒｒｌ基因编码序列克隆至真核表达载体－－Ｔ２Ａ－ｃｏＧＦＰ－ＭＳＣＶ构建重组质粒ＣＤＨ－ＮｕｒｒｐＣＤＨＭＣＳｐｐｌ，并进行酶切鉴定及－ｒｒ序列分析。再脂质体转染试剂介导重组质粒ｐＣＤＨＮｕｌ转染小胶质细胞。３．向过表达Ｎ

7、ｕｒｒｌ基因的小胶质细胞和单纯小胶质细胞中加入ＬＰＳＷ激活，并设阴性对照组，相同时间点收集各组细胞培养液，用ＥＵＳＡ法检测不同状态下小胶质细胞分泌炎症相关因子和神经营养因子的差异Ｗ及Ｎｕｒｒｌ基因对不同状态下小胶质细胞分泌上述各种因子的影响。４．解剖分离孕１４ｄ的ＳＤ大鼠胚胎腹侧中脑组织，经机械吹打制成单细胞悬液，接种于ＮＳＣｓ完全培养基中，观察其生长、分化并进行Ｎｅｓｔｉｎ免疫细胞化学鉴定Ｗ及诱导分化后－－、（接种于ＮＳＣｓ分化培养基中）的ｐ３ｔｕｂｕｌｉｎＧＦＡＰ、ＴＨ免疫细胞化学鉴定。

8、５．采用ＴｒａｎｓｗｅＵ系统，下层培养小胶质细胞，上层培养ＮＳＣｓ，并分组如下：（１）单纯小胶质细胞与ＮＳＣ洪培养；（２）过表达Ｎｕｒｒｌ基因的小胶质细胞与ＮＳＣｓ共１昆明医科大学硕±研巧生学位论文３ｄ６ｄ培养。在共培养、、９ｄ时，观察两姐ＮＳＣｓ的存活、生长，Ｗ及向ＤＡ能神经元分化的情况。