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《磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国动物传染病学报2015,23(3):36—41ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定张梦,刘迎春,蒋蔚,陈永军,张花景,薛俊欣L。,宫枫举,曾鹏。,王民燕,王权(1.中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;2.南京农业大学动物医学院,南京210095)摘要:应用重氮化方法制备了磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazinesodium、SPZ)完全抗原SPZ—OVA,将成功偶联的人工全抗原(SPZ.OVA)免疫BALB/c小鼠,免疫4次
2、后,经间接ELISA检测,1号小鼠血清抗体效价达到1:6.4×10。取该小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。利用ELISA方法对融合后的杂交瘤细胞上清进行检测,筛选出能够稳定分泌抗体的细胞株:D9。将细胞株D9扩大培养后,经腹腔注射小鼠使其产生腹水。腹水单抗经纯化后,通过间接竞争ELISA对该单克隆抗体的效价、半数抑制浓度以及特异性进行检测。结果表明,所制备的单克隆抗体效价为1:4×10,半数抑制浓度为326ng/mL,特异性良好。关键词:磺胺氯吡嗪钠;单克隆抗体;间接竞争ELISA中图分类号:$859.795文献标志码:A文章编号:1674—
3、6422(2015)03—0036—06GENERATIoNoFAMoNoCLoNALANTIBoDYAGAINSTSULFACHLoRoPYRAZINESoDIUMZHANGMeng,LIUYing.chun,JIANGWei,CHENYong-jun,ZHANGHua-jing,XUEJun.xin,GONGFeng-ju,ZENGPeng,WANGMin—yan,WANGQuan{1.ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAS,Shanghai200241.China;2.CollegeofVet
4、erinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing21009~China)Abstract:Inthisstudy,sulfachloropyrazinesodium(SPZ)wasco~ugatedwithovalbumin(OVA)forpreparationofimmuneantigenthroughdiazotizationmethod.Theartificialantigen(SPZ—OVA)wasusedtoimmunizeBALB/cmice.Afterfourthimm
5、unization,mouseserumsampleswerecollectedandantibodiesweretitratedtobe1:6.4x10inindirectenzyme—linkedimmunosorbentassayrELISA).Themousewithhighertiterwassacrificedandspleenwascollectedforhybridomaproduction.ThehybridomacellswerescreenedforantibodyproductioninELISA.Onepositi
6、vehybridomasD9wasobtainedandsubclonedbylimiteddilution.Astableantibody—producingclonewasthenidentifiedandpropagated.ThemouseascitescontainingmonoclonalantibodieswereproducedandtestedforELISAtiterandhalfinhibitionconcentration(IC50).Asafact,theMAbD9hadELISAtiterat1:4x10andh
7、alfinhibitionconcentration(IC50)at326ng/mL.Keywords:Sulfachloropyrazinesodium;monoclonalantibody;indirectcompetitiveELISA收稿日期:2015-03-23基金项目:上海市技术标准专项(13DZ0502701)作者简介:张梦,女,硕士研究生,预防兽医学专业通信作者:王权,E—mail:wangquan@shvri.ac.cll第23卷第3期张梦等:磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定磺胺类药物(sulfonamides,SAs)
8、具有对氨基(10g/L),并用淀粉碘化钾试纸实时监测,试纸刚苯磺酸结构,该类药物抗菌谱广,因其价格低廉、变蓝时停止滴加反应液,CC避光反应10min。使用方便在动物养殖中被广泛使
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