磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、中国动物传染病学报2015，23(3)：36—41ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定张梦，刘迎春，蒋蔚，陈永军，张花景，薛俊欣L。，宫枫举，曾鹏。，王民燕，王权(1．中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；2．南京农业大学动物医学院，南京210095)摘要：应用重氮化方法制备了磺胺氯吡嗪钠(sulfachloropyrazinesodium、SPZ)完全抗原SPZ—OVA，将成功偶联的人工全抗原(SPZ．OVA)免疫BALB／c小鼠，免疫4次

2、后，经间接ELISA检测，1号小鼠血清抗体效价达到1：6．4×10。取该小鼠脾细胞与SP2／0细胞融合。利用ELISA方法对融合后的杂交瘤细胞上清进行检测，筛选出能够稳定分泌抗体的细胞株：D9。将细胞株D9扩大培养后，经腹腔注射小鼠使其产生腹水。腹水单抗经纯化后，通过间接竞争ELISA对该单克隆抗体的效价、半数抑制浓度以及特异性进行检测。结果表明，所制备的单克隆抗体效价为1：4×10，半数抑制浓度为326ng／mL，特异性良好。关键词：磺胺氯吡嗪钠；单克隆抗体；间接竞争ELISA中图分类号：$859．795文献标志码：A文章编号：1674—

3、6422(2015)03—0036—06GENERATIoNoFAMoNoCLoNALANTIBoDYAGAINSTSULFACHLoRoPYRAZINESoDIUMZHANGMeng，LIUYing．chun，JIANGWei，CHENYong-jun，ZHANGHua-jing，XUEJun．xin，GONGFeng-ju，ZENGPeng，WANGMin—yan，WANGQuan{1．ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,CAAS,Shanghai200241．China；2．CollegeofVet

4、erinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing21009~China)Abstract：Inthisstudy,sulfachloropyrazinesodium(SPZ)wasco~ugatedwithovalbumin(OVA)forpreparationofimmuneantigenthroughdiazotizationmethod．Theartificialantigen(SPZ—OVA)wasusedtoimmunizeBALB／cmice．Afterfourthimm

5、unization，mouseserumsampleswerecollectedandantibodiesweretitratedtobe1：6．4x10inindirectenzyme—linkedimmunosorbentassayrELISA)．Themousewithhighertiterwassacrificedandspleenwascollectedforhybridomaproduction．ThehybridomacellswerescreenedforantibodyproductioninELISA．Onepositi

6、vehybridomasD9wasobtainedandsubclonedbylimiteddilution．Astableantibody—producingclonewasthenidentifiedandpropagated．ThemouseascitescontainingmonoclonalantibodieswereproducedandtestedforELISAtiterandhalfinhibitionconcentration(IC50)．Asafact，theMAbD9hadELISAtiterat1：4x10andh

7、alfinhibitionconcentration(IC50)at326ng／mL．Keywords：Sulfachloropyrazinesodium；monoclonalantibody；indirectcompetitiveELISA收稿日期：2015-03-23基金项目：上海市技术标准专项(13DZ0502701)作者简介：张梦，女，硕士研究生，预防兽医学专业通信作者：王权，E—mail：wangquan@shvri．ac．cll第23卷第3期张梦等：磺胺氯吡嗪钠单克隆抗体的制备及鉴定磺胺类药物(sulfonamides，SAs)

8、具有对氨基(10g／L)，并用淀粉碘化钾试纸实时监测，试纸刚苯磺酸结构，该类药物抗菌谱广，因其价格低廉、变蓝时停止滴加反应液，CC避光反应10min。使用方便在动物养殖中被广泛使