磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与1鉴定

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1、1922010,Vol.31,No.11食品科学※生物工程磺胺嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定王刘花，许杨*，郭杰标，张泓，何庆华(南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，中德联合研究院，江西南昌330029)摘要：采用重氮法同时制备结合比分别为9.0、8.0、3.7的3种磺胺嘧啶免疫抗原，并将其免疫BALB/c小鼠，其中结合比为8.0的一组免疫效果最佳。获得一株稳定分泌抗磺胺嘧啶单克隆抗体的杂交瘤细胞(1F6)，体内诱生法制备腹水。间接ELISA测定腹水效价为1:1.28×106，建立间接竞争ELISA标准曲线，其检测下限为10.4ng/mL，线性范围为14.8～421.5ng/m

2、L，IC50值为79.1ng/mL，与磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶交叉反应率分别为0.3%、0.99%、4.5%，与磺胺甲噁唑、磺胺喹恶啉、对氨基苯甲酸、磺胺、对氨基苯磺酸未见有交叉反应。经鉴定，单克隆抗体免疫球蛋白为鼠IgG的2b亚类。关键词：磺胺嘧啶；重氮法；酶联免疫检测；单克隆抗体PreparationandIdentificationofAnti-sulfadiazineMonoclonalAntibodyWANGLiu-hua，XUYang*，GUOJie-biao，ZHANGHong，HEQing-hua(Sino-GermanyJointRese

3、archInstitute,StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,NanchangUniversity,Nanchang330029,China)Abstract：Inordertogenerateamonoclonalantibody(McAb)againstsulfadianzine(SD),threeseparateimmunogenswithSD/BSAconjugationratiosof9.0,8.0and3.7werepreparedbydiazotizationmethodandBALB/cmiceweret

4、henimmunizedwiththeimmunogens.AnoptimumimmunizationwasobservedinBALB/cmiceimmunizedwiththeimmunogenwithmiddleSD/BSAconjugationratio.AMcAb(1F6)withhighaffinitytoSDwasobtainedbyhybridomatechnique.ThetiteroftheMcAbwas1:1.28×106inascitesaccordingtotheindirectELISAdetermination.IC50andthelowestd

5、etectablelimit(LDL)oftheMcAbinlinearrangeof14.8－421.5ng/mLforSDwere79.1ng/mLand10.4ng/mL,respectively.Thecross-reactivityratiosoftheMcAbagainstsulfamethazine,sulfamonomethoxineandsulfamethoxydiazinewere0.3%,0.99%and4.5%,respectively,whilenocross-reactivitytosulfamethoxazole,sulfaquinoxaline

6、,4-aminobenzoicacid,sulfanilamideorsulfanilicacidwasobserved.Thesub-classoftheMcAbwasidentifiedasIgG2b.Keywords：sulfadiazine；diazotization；ELISA；monoclonalantibody中图分类号：S859.84文献标识码：A文章编号：1002-6630(2010)11-0192-05磺胺类药物是人工合成的具有对氨基苯磺酰胺结构磺胺类药物的不合理使用，使其在动物性食品中的的一类抗菌药物的总称，在兽药和医学临床上不仅有预残留问题日趋严重，对

7、人类健康带来巨大的危害。农防和治疗作用，而且还有生长促进剂的作用[1]，常被用业部在2008年动物性食品中兽药残留监控计划的通知作动物食品添加剂，分子结构如图1所示。中，对磺胺类药物在猪肉、鸡肝、鸡肉、牛奶及羊肉中的残留限量及检测方法作了规定，主要包括：高效O液相色谱法[2]、色谱-质谱联用法[3]及酶联免疫法[4-6]。免HHNSN疫学检测方法具有特异性强、灵敏度高、方便快捷、R2R1O成本低等特点，已被大量用于食品安全与检测中。在免图1磺胺类药物结构式疫学检测方法中，人工抗原的合成是单克隆抗体制备的