磷酸化Smad3在神经元样细胞氧糖剥夺中的表达变化.pdf

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1、中国实验诊断学2015E县箜!鲞笙塑一523一文章编号：1007—4287(2015)04—0523—03磷酸化Smad3在神经元样细胞氧糖剥夺中的表达变化徐仲航，王一鸣，王勇涛，王姣琦，何金婷，莽靖孙，邵延坤弘，徐忠信。(1．吉林大学白求恩医学部I临床医学院，吉林长春130021；2．吉林大学中日联谊医院神经内科，吉林长春130033)摘要：目的探讨磷酸化Smad3蛋白在神经元样PC12细胞氧糖剥夺中的表达变化。方法利用鼠神经生长因子(NGF)诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)向神经元样细胞转化，应用无糖DMEM培养液联合连二亚硫酸钠(Na。SO

2、)构建氧糖剥夺模型(oxygen-glucosedeprivation，OGD)，体外模拟神经元缺血性损伤。MTT检测神经元样细胞OGD0，3，6和12h存活率，Westernblot检测OGD前后磷酸化Smad3蛋白表达。结果成功建立神经元样PCI2细胞的OGD模型；OGD3h后细胞存活率显著下降，至OGD12h降至最低54．7；细胞内磷酸化Smad3表达在OGD3、6h与OGD0h组相比略升高，至OGD12h时明显降低。结论磷酸化Smad3参与在神经元样细胞OGD早期ActA／Smads通路的活化。关键词：AetA／Smads；磷酸化Smad3

3、；OGD中图分类号：R743．3文献标识码：AChangesofSmadsmRNAinnerve-likecellsafterOGDinjuryXUZhong—hang，WANGYi—ruing，WANGYong—tao，eta1．(NormanBethuneHealthCenterofJilinUniversity，Changchun130021，China)Abstract：ObjectiveToexplorechangesofphosphorylatedSmad3(p-smad3)expressioninneuron—likePC12cell

4、safteroxygen-glucosedeprivation(OGD)．MethodsRatnervegrowthfactor(NGF)wasusedtoinducethedifferentia—tionofrattusPC12pheochromocytomacellstoneuron—likecells．Na2S2O4andglucose—freeDMEMwereintroducedtoperformanOGDmode1．ThesurvivalrateofcellssufferedbyOGDwasexaminedbyMTTassay．Andth

5、eproteinex—pressionofp-smad3measuredbyWesternblot．ResultsPC12cellsweresuccessfullydifferentiatedintoneuron-likecellsafterNGFexposure．Thesurvivalrateofcellsweredramaticallydecreasedafter3hofOGDexposure，andreachedtoitslowestpointat12h．ComparedwithOGDOh，expressionofp-Smad3wasslig

6、htlyincreasedafter3or6h，andsig—nificantlydecreasedat12h．ConclusionP—Smad3tookpartintheactivationofActA／SmadssignalinginresponsetoearlytimeofOGDtreatment．Keywords：ActA／Smads；phosph0ry1atedSmad3；OGD(ChinJLabDiagn，2015，19：0523)研究发现，激活素A(ActivinA，ActA)作为转1材料和方法化生长因子J3(transforming

7、growthfactorbeta，1．1主要材料TGF一0)超家族的成员之一，主要通过ActA／Smads大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞购自北京金紫晶生信号转导通路在缺血性脑损伤中发挥神经保护作物医药技术有限公司。兔抗大鼠磷酸化Smad3抗用_】]。本研究利用PC12神经元样细胞OGD模型体购自美国ThermoFisher公司，小鼠抗大鼠t?-ac—体外模拟神经细胞缺血性损伤。。]，动态检测OGDtin抗体购自美国Santa公司，兔抗大鼠NSE抗体，不同时间磷酸化Smad3蛋白表达变化，以期明确脑辣根过氧化物酶标记的羊抗兔、羊抗鼠二抗，FITC缺血损伤

8、中ActA／Smads通路细胞内信号转导模标记的羊抗兔IgG二抗购自北京博奥森生物技术式。有限公司。1．2实验方法基金项目