低强度微波辐射对晶状体上皮细胞和晶状体的损伤及对相关调控基因表达的影响

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1、浙江大学博士学位论文低强度微波辐射对晶状体上皮细胞和晶状体的损伤及对相关调控基因表达的影响姓名：王凯军申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：姚克20040501竺兰查!!竺竺苎主苎垒垒苎竺±!!曼RLECsWSPUSPASPSPWIPEBAP—lPCDSARPKCIEGsDMSOPBSSDSMEMAAHPIEDTA缩略语AbbreviationRabbitJ

2、ensEpithelialCellsW}【terSolLiblePFOLeinLteaS01ubleProLeinAIkaliSolubleProteinSo

3、niCatedProteinWateF—insolublePFOteinActivatorProteinProteinKinaseCDim“hv】Sull、OXidePhosphate-Buff。eredSalflqeSodiumDodecylSulfateMinimumEssenLinlMediumArtifiCialAquousHumorPropidiumIodideDisodi[1111Ethylenediaminetetra—acetate兔晶状体上皮细胞水溶性蛋白脲溶性蛋白碱溶性蛋白超声溶性蛋白水不溶性蛋白

4、溴乙锭激活剂蛋白一1程序性细胞死亡比吸收率蛋白激酶c早期快反应基因二甲基亚砜磷酸缓冲盐溶液十二烷基硫酸钠伊格尔培养基人工房水碘化丙啶乙二胺四乙酸晰江上学眼科学博士学啦论文——JIf宪搞姜煳年j11g论文摘要中文摘要低强度微波辐射对晶状体上皮细胞和晶状体的损伤第一部分及对相关调控基因表达的影响浙江大学医学院眼科学博士研究生王凯军导师姚克教授低强度微波辐射阻断晶状体上皮细胞周期及对相关调控基因表达的影响【目的】柃测不同剂量微波辐射对兔晶状体上皮细胞(r￡tbbh】cnsepithuIi{11。uIIs队¨x)增殖活性及细

5、胞周期的影响，并测定微波辐射后细胞周期调控基冈恺I””、r27“和c—myc表达量的改变。切步探讨体外培养的兔晶状体上皮细胞对微波辐射损伤的耐受剂量，以及辐射损伤的分了机制。【方法】应H=

6、频率2450MItz，功率密度分别为0．10mW／cm：、0．2．5mW／cm：、0．．50mw／cm，、I．00mW／cm：、2．00mW／cm一的微波连续辐照体外培养的RLECs8h，分别J；}=

7、相差显微镜和⋯：染色观察辐射后细胞形态学的改变：四唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖活性：I，【荧光染色后_I}j流式细胞仪检测微波

8、辐射对细胞周期各个时相的影响；W。sLcrn印迹-I-￡山晰汪土学摹科学博士学位论文——研竟摘垂删年j一岳法检测2．00mW／cm’微波辐照4h、6h和8h后P2l”。。、P27“⋯。和c—myc基因表达量的改变。盯一PCR法检测P2l”⋯、P27“”。mRNA的表达。【结果】高于0．50mW／cm：的微波连续辐射8h，可降低细胞增殖活性：用相差显微镜观察发现．微波辐射日，引起l扎ECs肿胀和聚集，甚至出现细胞幽缩和脱壁现象：同时高于0．50mW／cm。的微波辐射町抑制细胞DNA合成．(∥G-期细胞百分比分别为71．

9、95‘％±212％、75．68％±3．35％、82．40％±8．68％，高于对照组6i．68％±5．76％，差异有显著性(1<0．05或I<0．01)：功率密度为0．IO、0．25mW／cm’的微波辐射组对细胞增殖活性和细胞周期无影响，与对照组比差异无显著性(Do．05)：2．OOmW／cm：微波辐照后1'27“”表达水平明显升高，辐照4h、6h、8h后的表达量分别是对照组的i．69±0lj、2．14±0．5l和2．32±0．30倍，差异有显著性(尼0．叭)，而c—myc表达水甲在辐射后下降，辐射4h、6h、8h后的

10、表达量分别是对照组的0．50±0．19、0．：{j±0．1l和0．1，I±o．04倍，差异有显著性(I<0．01)，I)2l”‘的表达量在辐射前后无变化(IJ>O．05)；I’2l““、P2Y“‘mKm的表达在辐射前后均无明显改变，与对照组比较差异无显著性意义("【)．0．5)。【结论】l、功率密度高于0．．50mW／cm?的微波辐射可引起扎ECs产生形态学改变，并阻断细胞增殖周期，使细胞停滞于G．．／G。期，这种损伤对晶状体的生长发育及维持其正常生理功能具有潜在的危害性。2、低强度微波辐射阻断晶状体上皮细胞增殖周期

11、可能通过分别调节P27“”。和c—myc这两个调控细胞周期转换的基因而实现的，对细胞周期另一重要的调控基因P21”1的表达不影响。：{、微波辐射对细胞周期(；．／S限制点重要调控因子P27“”1的调节可能为转录后调节，主要通过调节P27“”。转录后的蛋白水平起作用，而对其mRNA的表达不影响。【关键词】微波；晶状体；上皮细胞：细胞周期；基因表达