鹦鹉热衣原体PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、·26·AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine2014Vo1．46No．9鹦鹉热衣原体PCR检测方法的建立唐泰山，王建忠，陈国强，姚火春，张常印，姜焱，(1．江苏出入境检验检疫局，江苏南京2．苏州市相城区畜牧兽医站，江苏苏州3．南京农业大学动物医学院，江苏南京摘要：针对16S一23SrRNA和主要外膜蛋白(MOMP)基因序列，分别设计引物，并建立了2种TaqMan荧光PCR、2种常规PCR和2种衣原体科通用PCR方法。经条件优化后，建立的6种PCR方法均具有良好的特异性

2、，其中建立的2种荧光PCR分别能检测出7拷贝和2拷贝的目标双链DNA，其灵敏度明显优于常规PCR；建立的2种衣原体通用PCR，其扩增的目标片段中包含的可变区能有效区分鹦鹉热衣原体和其他衣原体。本试验建立的多种PCR方法敏感特异，具有良好的应用前景。关键词：鹦鹉热衣原体；TaqMan荧光PCR；常规PCR中图分类号：$852．67文献标志码：A文章编号：0529—5130(2014)09-0026-05通信作者：姚火春(1963一)，男，教授，主要从事预防兽医学收稿日期：2013—11—29基金项目：

3、江苏出入境检验检疫局科研项目(2010KJ02)研究，E—mail：yaohch@njau．edu．cn通信作者：张常印(1960一)，男，研究员，主要从事动物检作者简介：唐泰山(1974一)，男，高级兽医师，博士研究生，主民；疫，E—mail：zhangchangyin@yahoo．corn要从事动物检疫其真阳性率、真阴性率和精确度达到人宫颈癌细胞检[3]孙小红，李婕，葛安靖．环境雌激素的生殖和发育毒性研究进展[J]．中国优生与遗传杂志，2013，21(4)：1—2，22．测等经典方法水平，非常适

4、合大量基层样本的大规模[4]JanssensG，MangelinckxS，CourtheynD，eta1．Applicationofgas筛选。不过，该验证方法是定性筛选方法，所以chromatography—massspectrometry／combustion／isotoperatiomass如果筛选出可疑样品需要得到证实。选择妊娠期和哺spectrometry(GC—MS／C／IRMS)todetecttheabuseof178一estra-乳母猪作为实验对象是真实物质载体，可以更好地说dio

5、lincattle[J]．JAgricFoodChem．2013，61(30)：明酵母细胞检测方法准确方便的优异性。7242—7249．随着环境雌激素进深一步的研究，环境雌激素的[5]李湘鸣，罗方妮，陈春波．快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究[J]．扬州大学学报(农业与生命科学版)，2005，26残留和食物源中的雌激素摄人对人类健康的影响越来(2)：11—14．越引人关注，雌激素类药物残留已经成为各国政府和[6]王娟，张遵真，党静，等．重组酵母测评系统检测环境雌激素人民最关心的问题之一，越来越多的

6、研究表明，食物的影响因素探讨[J]．现代预防医学，2005，32(2)：源性雌激素残留，通过食物链在人体内积累，对人体124—127．存在潜在危害。要减少性激素污染对食品安全和人体[7]KolleSN，RamirezT，KampHG，eta1．Atestingstrategyfortheidentificationofmammalian，systemicendocrinedisruptorswithpar-健康造成的威胁，必须加强市场监管，完善检测手ticularfocusonsteroids[J]

7、．RegulToxicolPharmacol，2012，63段，而快速、高通量、高灵敏度、低能耗、多组分分(2)：259—278．析是未来畜产品中雌激素分析检测方法发展方向。[8]SanfilippoK，PintoB，ColombiniMP，eta1．Determinationoftraceendocrinedisruptorsinultrapurewaterforlaboratoryrisebytheyeast参考文献：estrogenscreen(YES)andchemicalanalysis(

8、GC／MS)[J]．Jour-nalofChromatographyB，2010，878：l190—1194．[9]KolleSN，KampHG，HuenerHA，eta1．Inhousevalidationof刘娟，熊承良．环境雌激素对雄性生殖系统的影响及研究进展recombinantyeastestrogenandandrogenreceptoragonistandantago-[J]．国外医学：计划生育分册，2004，23(1)：14—17．nistscreen