犬细小病毒病PCR检测方法的建立及应用-论文.pdf

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1、生物灾害科学2013，36(4399—402http：／／xuebao．jxau．edu．cnBiologicalDisasterScience，Vo1．36，No．4，2013swzhkx@163．comDOI：10．3969／j．issn．2095-3704．2013．04．012犬细小病毒病PCR检测方法的建立及应用陶明江，张祥华，孙明，余恩超，陆家卿，王萍，何后军，邬向东，戴益民(江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌330045)摘要：犬细小病毒病感染是由犬细小病毒(cPv)引起犬只死亡的最重要传染病之一，目前诊断该病的方法主要是胶体金快速检测试板法，虽然检测方法较简便快速，但其敏感

2、性较差。通过对NCBI网站GenBank发表的CPV-2基因组序列的分析，选择该病毒VP2基因保守序列设计引物，通过对阳性病料扩增及扩增产物测序，与NCBI发表的相关基因对比，同源性在99．8％100％，成功建立了特异性、灵敏度高的PCR方法，最低只需2．5PgDNA模板。在对28例可疑CPV病例检测中，本方法检出25例阳性、3例阴性，阳性率为89．28％；胶体金检测板检测出20例阳性、8例阴性，阳性率为71．42％，证实PCR方法比胶体金检测更敏感。关键词：犬细小病毒；PCR；检测方法中图分类号：$852．655文献标志码：A文章编号：2095．3704(2013)04．0399．04Est

3、ablishmentandApplicationofPCRDetectionMethodsofCanineParvovirusTAOMing-jiang，ZHANGXiang-hua，SUNMing，YUEn-chao，LUJia—qing，WANGPing，HEHou-jun，WUXiang．dong，DAIYi．min(CollegeofAnimalScienceandTechnology,JiangxiAgriculturalUniversity,Nanchang330045，China)Abstract：Canineparvo~msinfectionIScausedbycamnepar

4、vovlrus(cPv)，andISoneofthemostimportantinfectiousdiseasescausingdogdeaths．Thecurrentdiagnosisofthediseasemainlyusesthecolloidalgoldrapiddetectiontestplatemethod．Althoughthisdetectionmethodismuchsimpleandrapid,butitssensitivityispoor．BasedontheanalysisofCPV-2genomesequencepublishedinthewebsiteNCBIGen

5、Bank，theauthorselectedthegeneconservedsequenceofthevirusVP2，thendesignedprimerstoampli~thematerialthroughpositivediseasesandsequencingofPCRproducts，andcomparedthemwithrelatedgenespublishedinNCBI．Wefoundtheywerehomologousfrom99．8％to100％．andsuccessfullyestablishedthePCRmethod、)l，ithspecificityandhighs

6、ensitivity,andthemimmumwasjust2．5PgDNAtemplate．In28casesofsuspiciousCPVcasedetection，thismethoddetected25casesaspositive，and3asnegative，wjth89．28％positiverate；thecolloidalgoldassayplatesdetected20casesaspositive，and8asnegative，with71．42％positiverate．ThisconfirmedthatthePCRmethodwasmoresensitivethant

7、hecolloidalgoldassaytest．Keywords：canineparvovirus；PCR；detectionmethods收稿日期：2013．09．29基金项目：江西省教育厅重点项目(GJJ10017)和江西省南昌市科技支撑项目(2012．KJZC-NY-002)作者简介：陶明江，男，硕士，主要从事动物传染病诊断与防治的研究，E-mail：740971666@qq．com；通信