番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用-论文.pdf

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1、中国动物传染病学报2013，21(6)：8-11ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用李林林，董嘉文，孙敏华，袁建丰，邝瑞欢，胡奇林(广东省农业科学院动物卫生研究所广东省兽医公共卫生公共实验室，广州510640)摘要：通过比对分析GenBank上登录的多株番鸭细小病毒(Muscovyduckparvovirus，MDPV)和鹅细小病毒(Gooseparvovirus)全基因序列，选取两种病毒间相似性较低的区域设计合成了2对特异性引物，建立了能快速鉴别诊断MDP

2、V的套式PCR方法。该法仅能特异地扩增MDPV，敏感性达到62copies／IxL，比普通PCR高1000倍。运用该方法对分离的12份临床样品进行检测，结果检测出2份MDPV。本试验所建立的套式PCR方法可用于MDPV感染的临床诊断和流行病学调查。关键词：番鸭细小病毒；套式PCR；特异性；检测中图分类号：$858．322．659．2文献标识码：A文章编号：1674—6422(2013)06—0008—04DEVELoPMENTANDAPPLICATIoNoFNESTEDPCRFoRDETECTIoNoFMUSCoVYDUCKPARVoVIRUSLILin

3、—lin，DONGJia—wen，SUNMin—hua，YUANJian—feng，KUANGRui-huan，HUQi—lin(GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryPublicHealth．InstituleofAnimalHealth．GuangdongAcademyofAgriculturalSciencesGuangzhou510640,China)Abstract：AccordingtothegenomesequencesofMDPVandGPVdepositedinGenBank，twopairsofnest

4、edPCRprimersweredesignedusingtheprimerpremier5．0andusedforthedevelopmentofanestedPCR．ThenestedPCRdevelopedinthepresentstudywas1,000timesmoresensitivethanaconventionalPCRandspecificallyamplifiedMDPVwiththesensibilityof62copies／LLL_Twooutof12clinicalducksamplesweretestedMDPVpositiv

5、einthismethod．ThisnestedPCRmightbeausefulmethodforclinicaldiagnosisandepidemiologyofMDPD．Keywords：Muscovyduckparvovirus；nestedPCR；diagnosis番鸭细小病毒病多发生于1-3周龄的雏番鸭，的母源抗体监测手段，导致临床上常发此病。又称为“三周病”，它是由番鸭细小病毒(Muscovy鹅细小病毒(Gooseparvovirus，GPV)与番鸭duckparvovirus，MDPV)引起的一种急性、败血性细小病毒同属于细小病毒科依赖

6、病毒属，主要侵害传染病。该病具有高度传染性和死亡率Ⅲ，发病率1月龄以下的雏鹅和雏番鸭。MDPV与GPV在病毒和死亡率可达40％～50％以上，是目前番鸭饲养业中的形态结构、理化特性及DNA序列上相似性很高危害最严重的传染病之一。目前，我国MDPV的，且两者在血清学上存在交叉反应。这两种细小病免疫程序比较混乱，无成熟的免疫方案，且无成熟毒是雏番鸭的常见病，临床上常在同一地区流行，收稿日期：2013—10—09基金项目：广东省自然科学基金博士启动项目($2011040001867)；公益性行业(农业)科研专项(201003012)作者简介：李林林，女，博士，助

7、理研究员，主要从事禽病的分子生物学和免疫学研究通信作者：胡奇林，E—mail：hq1562713@163．corn第21卷第6期李林林等：番鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用用常规的血清学检测方法很难将这两种病毒区分开(TaKaRa)试剂盒说明进行。分别以病原DNA和来H。为了能快速准确地鉴别这两种病毒，已经建cDNA为模板进行PCR扩增。立了多种PCR鉴别诊断方法和LAMP鉴别诊断方法。1．2．3套式PCR方法的建立以MDPV的DNA作为套式PCR以常规PCR为基础，特异性和敏感性比模板，建立PCR反应，采用25L的反应体系：预常规PCR高许多，

8、本研究旨在建立一种陕速鉴别诊混ExTaq12．5txL，MDPVF1／R1引物各