同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008·0589．2014．01．08同时检测猫细小病毒、杯状病毒、疱疹病毒1型多重PCR方法的建立王种1,2，刘大飞1,2，刘春国，柴洪亮，张洪英，程景，吕健，华育平，曲连东·(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．东北林业大学生命科学学院

2、，黑龙江哈尔滨150040；3．黑龙江省农产品质量检验检测中心，黑龙江哈尔滨150090；4．国家知识产权局专利审查协作北京中心，北京100193)摘要：为建立检测多种猫科病毒的多重PCR方法，本研究参照GenBank中登录的猫细小病毒(FPv1的NS基因序列、猫杯状病毒(FCV)的ORF2基因序列以及猫疱疹病毒(FHV．I)的TK基因序列设计合成3对引物，通过对反应体系及条件的优化，建立了可以同时扩增FPV(392bp)、FCV(922bp)和FHV．I(290bp)的多重PCR方法。该检测方法结

3、果表明：在同一PCR反应体系中可以同时检测出以上3种病毒，FPV、FCV和FHV的最低检出限分别为10TCID10TCID50和10TCID0。以该方法对黑龙江省各地区收集的120份血清进行检测，其中FPV、FCV和FHV—I的阳性率分别为5％(6／120)、2．5％(3／120)和4．1％(5／12o)，证明该方法可以用于3种病毒的检测，具有良好的特异性和敏感性。关键词：猫细小病毒；猫杯状病毒；猫疱疹病毒；多重PCR中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)0

4、1—0031-03EstablishmentofthemultiplexPCRfordetectingfelinepanIeUkOpeniavirus，felinecalicivirusandfelineherpesvirus—IWANGChong，一，LIUDa-fei，一，LIUChun—Guo，CHAIHong—liang2，ZHANGHong-ying，CHENGJing，LVJian4，HUAYu—ping2，QULian—dong(1．StateKeyLaboratoryofVeteri

5、naryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciencesHarbin150001，China；2．CollegeofLifeScience，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China；3．InspectionandTestingCenterf0rAgriculturalProductsQualityofHeilongjiang，Ha

6、rbin150090，China；4．PatentExaminationCooperationCenterofthePatentOmce，SIPO，Beijing100193，China)Abstract：Toestablishamethodforsimultaneousdetectionoffelinepanleukopeniavirus(FPV)，felinecalicivirus(FCV)andfelineherpesvirus—I(FHV—I)，amultiplexPCRwasdevelop

7、edwithasetofspecificprimersdesignedbasedontheconservedsequenceswithinNSofFPV，ORF2ofFCVandTKofFHV—I．UndertheoptimizedconditionsofmultiplexPCR，threespecialfragmentsforFPV(392bp)，FCV(922bp)andFHV-I(290bp)wereamplifiedwithadetectionlimitof10TCIDso，10TCIDso

8、and10TCID50，respectively．ThirtyclinicalsamplesofafecteddogsfromdiferentareasofHeilongjiangprovinceweredetectedbythemultiplexPCR，anddetectionratewas5％(6／120)forFPV，2．5％(3／120)forFCVand4．1％(5／120)forFHV—Irespectively，whichindicatedthatthe