大豆脱水应答元件结合蛋白（GmDREB1）的非融合原核表达及纯化-论文.pdf

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1、第42卷第3期卫生研究Vo1．42No．33922013年5月JOURNALOFHYGIENERESEARCHMav2013文章编号：1000．8020(2013)03-0392-07·论著·大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1)的非融合原核表达及纯化宫照龙卓勤吴景欢朴建华杨晓光中国疾病预防控制中心营养与食品安全所卫生部微量元素营养重点实验室，北京100050摘要：目的大豆脱水应答元件结合蛋白(GmDREB1转录因子)基因是应用于转基因小麦中增强其耐旱、盐碱的基因，本研究拟探索获得与天然蛋白GmDREB

2、1一致的蛋白表达纯化方法，以获得足量的蛋白纯品，为该外源蛋白的安全性评价奠定基础。方法将GmDREB1基因克隆到原核表达载体pBV220中，构建重组表达载体pBV220一GmDREB1，转化E．coliDH5U进行诱导表达，通过优化GmDREB1基因密码子、改善诱导表达条件及选择合适的表达载体等实现目的蛋白的高效表达，对表达产物进行阳离子交换和分子筛等层析纯化，对获得的纯化蛋白进行序列、活性及免疫原性等测定。结果含序列优化目的基因的重组载体pBV220一GmDREB1转化E．coliDH5a后，经42℃诱导

3、表达2小时，获得了以可溶性为主的GmDREB1蛋白，经层析纯化获得了与天然目的蛋白一致的蛋白纯品。结论利用本研究方法可得到在N端序列、活性及免疫原性等方面与天然GmDREB1蛋白一致的目的蛋白。关键词：转基因小麦GmDREB1转录因子非融合蛋白原核表达纯化安全性评价中图分类号：TS201．6Q78文献标识码：AStudyonno-fusionexpressionandpurificationofglycinemaxdehydration·responsiveelement-bindingprotein(Gm

4、DREB1)expressedinE．coliGONGZhaolong，ZHUOQin，WUJinghuan，PIAoJianhua，YANGXiaoguangInstituteforNutritionandFoodSafety，ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention，Beijing100050，ChinaAbstract：ObjectiveToobtainenoughGmDREB1proteincomparablewithnativeproteinforfu

5、rthersafetyassessmentoftheprotein．MethodsTheGmDREB1genewasclonedintono·-fusionexpressionvectorpBV220andtherecombinantvectorpBV220—-GmDREB1wasobtained．TheconstructedvectorwastransformedintoexpressionhostE．coliDH5a．Theproteinexpressionwasoptimizedbyimproving

6、thecodon，inducedexpressionconditionsandselectingtheappropriatevector．Theproteinwasobtainedbycationexchangechr0matographyandgelfiltrationchromatographyandidentifiedbyN—terminalaminoacidsequencing，westernblottingandactivitydetermination．ResultsThesolubleprot

7、einwasexpressedeficientlyinE．coliDH5acontainingtheoptimizedtargetgeneby42~Cinductionfor3hoursandthepurifiedproteinconsistentwiththenative基金项目：转基因生物新品种培育科技重大专项(No．2011ZX08011-005)作者简介：宫照龙，男，助理研究员，研究方向：转基因生物的安全性评价1通讯作者：杨晓光，男，研究员，博士生导师第3期宫照龙，等．大豆脱水应答元件结合蛋白(Gm

8、DREB1)的非融合原核表达及纯化393proteinwasobtainedthroughthechromatography．ConclusionTheresuhsofthisstudyillustratedthattheGmDREB1proteincouldbeacquiredthroughprokaryotichostexpressionwhichhadcomparableN-terminalaminoaci