大豆GmGBP1基因的原核表达及重组蛋白纯化-论文.pdf

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1、第31卷第6期大豆科学Vo1．31No．62012王E12月S0YBEANSCIENCEDec．2012大豆GmGBP1基因的原核表达及重组蛋白纯化张彦威，刘丽雪，赵琳，谷月娇，卢清瑶，宋仙萍，李文滨(东北农业大学大豆生物学教育部重点实验室，东北农业大学农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室，黑龙江哈尔滨150030)摘要：将大豆中已克隆的一个新的s基因(GmGBP1)构建到原核表达载体pGEX-6p一1上，导入大肠杆菌BL21(DE3)中，对其进行IPTG诱导。结果表明：在IPTG浓度为0．1mmol·L一，诱导时间为8h，诱导温度为37℃

2、时，重组蛋白得到表达，分子量大约为95kDa，SDS—PAGE电泳结果表明重组蛋白主要以包涵体形式存在，用8mol·L尿素对其进行溶解后经GST柱纯化，得到较好的纯化效果。关键词：大豆；SKIP；原核表达；包涵体；纯化中图分类号：$565．1文献标识码：A文章编号：1000—9841(2012)06-0874—04ProkaryoticExpressionandProteinPurificationofSoybeanGmGBP1GeneZHANGYan—wei，LIULi—xue，ZHAOLin，GUYue-jiao，LUQing—yao，

3、SONGXian—ping，LIWen—bin(KeyLaboratoryofSoybeanBiologyinChineseMinistryofEducation，KeyLaboratoryofSoybeanBiologyandBreeding／GeneticsofChineseAgricultureMinistry，NortheastAculturalUniversity，Harbin150030，Heilongjiang，China)Abstract：AnewSPhomologinsoybeanwasconstructedintopro

4、karyoticexpressionvectorpGEX一6p一1andthentransformedintoE．colBI21(DE3)togettheexpressionproteinforfurtherstudy．Theresultindicatedthatan95kDarecombinantproteinwasexpressedwiththetreatmentof0．1mmol·LIGfor8hat37℃．therecombinantproteinwasconfirmedtomainlyexistedininclusionbodyf

5、ormbvSDS．PAGE．Thehigh—qualityrecombinantproteinwasobtainedthroughGSTcolumnpurificationaftertheinclusionbodywasdissolvedwith8mol·L—urea．Keywords：Soybean；SKIP；Prokaryoticexpression；Inclusionbody；Purification干旱、盐碱、高温等逆境严重制约着作物的产1材料与方法量水平，因此培育耐逆品种是扩大作物生长区域，维持作物稳产、高产的重要手段。细胞活力被

6、认为1．1试验材料是植物在逆境中生存的一个重要指标。很多研究大豆品种东农42、原核表达载体pGEX．6p一1、表明植物激素脱落酸(ABA，Abscisicacid)在植物的大肠杆菌DH5c~菌株、大肠杆菌BI21(DE3)菌株均逆境胁迫反应中起着重要的作用。SKIP(Ski—inter—由东北农业大学大豆研究所提供。pMD18一T、各种actingprotein)是真核生物中的转录共激活子，在转限制性内切酶和T连接酶均购自TaKaRa公司；录和剪切中发挥保守的共激活作用。SKIP基因DNA凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒购自Ome．在真核生物

7、中能够调节细胞活力_2J，响应植物的ga公司；低分子量蛋白Marker购自Solarbio公司；ABA信号并改善植物的抗逆水平J，并且相关研DNAMarker购自Transgen公司；GST融合蛋白纯化究也表明大豆该基因能改善大豆对高温和干旱的试剂盒(内含GSHSepharose4B50％悬液、1XPBS耐性。因此，研究大豆SKIP基因(GenBank登陆和还原型GSH溶液)购自中科晨宇公司；其它药品号：DQ112540)对大豆抗逆性状的改良具有重要的或试剂均购自伊事达公司。理论和实际意义。1．2试验方法本实验室从大豆中克隆得到一个编码SK

8、IP蛋1．2．1GmGBP1基因的扩增根据GmGBP1基因白的基因，命名为GmGBP1。为更好的在蛋白水平序列设计引物，并在其上下游引入酶切位点EcoRI上研究GmGBP1的功能