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《重组人蛋白激酶亚基的原核表达纯化与鉴定3》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、ISSN100727626中国生物化学与分子生物学报第16卷第1期CN1123870öQChin.J.Biochem.Mol.Biol.2000,Vol.16,No.1,17～222000年 2月3重组人蛋白激酶CK2A亚基的原核表达、纯化与鉴定33刘新光 梁念慈马涧泉(广东医学院医用生化研究所,湛江 524023)(中山医科大学生化教研室,广州 510089)摘要 将构建成功的人蛋白激酶CK2A亚基cDNA的重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获特异高效表达,表达蛋白占菌体总蛋白的30%,但大多数重组蛋白以不溶形式存在L表达产物依次进行DE252、P11磷酸
2、纤维素和肝素2Sepharose柱层析分离,最后从309mg可溶性蛋白质中得到611mg纯化蛋白LSDS2PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量42kD的单一蛋白带LWestern2blot的结果证明:纯化的表达产物与抗人CK2A抗体可发生特异性免疫反应LCK2A和B亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶L重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致1这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶CK2A亚基L关键词 人蛋白激酶CK2A亚基,原核表达,蛋白质纯化中图分类号 Q55,Q812ProkaryoticExpression,PurificationandCharacterizatio
3、nofRecombinantHumanProteinKinaseCK2ASubunitLIUXin2guang,LIANGNian2ci(InstituteofMedicalBiochemistry,GuangdongMedicalCollege,Zhanjiang524023)MAJian2quan(DepartmentofBiochemistry,SunYat2senUniversityofMedicalSciences,Guangzhou510089)AbstractTherecombinantplasmidcontaininghumanproteinkinaseCK2As
4、ubunitcDNAcon2structedsuccessfullywastransformedintoEscherichiacoliBL21(DE3)andexpressedsignificant2lyandspecificallyinducedbyIPTG.Therecombinantproteinwascomposedofapproximately30%ofthetotalbacterialproteins,however,mostofrecombinantwhichwereinsoluble.There2combinanthumanCK2Asubunitsequentia
5、llywaspurifiedbyDE252,P11phosphocelluloseandHeparin2Sepharosechromatography.From309mgsolubleproteins,theyieldoftheCK2Aproteinwas6.1mg.SDS2PAGEanalysisofthepurifiedrecombinantproteinshowedonlyonebandwithmolecularmassof42kDinagreementwithnativehumanCK2Asubunit.Westernblotresultcon2firmedthatthe
6、recombinantproductcouldspecificallyreactwithantibodyagainsthumanCK2Asubunit.TheCK2AandBsubunitsweremixedatthesamemolarratio.TheproducedCK2holoenzymedisplayedthefullactivity.ThecharacterizationsandfunctionsofreconstitutedCK2holoenzymewereconsistentwiththoseofthegivennativeCK2.Theseresultsdemon
7、stratedthattherecombinantproteinwashumanproteinkinaseCK2Asubunit.KeywordsHumanproteinkinaseCK2Asubunit,Prokaryoticexpression,Proteinpurification3广东省自然科学基金(940586)和广东省高教厅重点学科经费资助项目33联系人 Tel:(0759)2388501,Fax:(0759)2284104,E2mail:gdmcpres@gdmc.
