溶藻弧菌胱硫醚-β-合成酶基因cbs的克隆、生物学信息分析及原核表达.pdf

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1、第36卷第3期2016年6月广东海洋大学学报JournalofGuangdongOceanUniversity、7r01．36No．3Jun．2016doi：10．39690．issn，1673—9159．2016．03．004溶藻弧菌胱硫醚咿合成酶基因c夙的克降、生物学信息分析及原核表达陈树河，常云胜，刘晖晖，周维，丁熵(广东海洋大学水产学院／／广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室。广东湛江524088)摘要：提取溶藻弧菌(Hbrioalginolyticus)的总DNA，克隆溶藻弧菌胱硫醚廿合成酶基因c缸，对其进行生物信息学分析。结果表明，所克隆溶藻弧菌C缸基因的开放阅

2、读框为1095bp，编码3“个氨基酸。氨基酸序列比对发现，溶藻弧菌的CBS蛋白与其他弧菌的CBS相似性极高，与副溶血弧菌(Ⅳparahaemolyticus)CBS氨基酸序列相似性达98％；CBS蛋白质的二级结构为典型的“a+B”折叠模式，无跨膜结构及信号肽。构建cbs!lI因表达载体(pGEX-cbs)以表达重组蛋白，结果显示，cbs嘉A因在大肠杆菌BL21中高效表达，可表达出分子质量约为66．4ku的融合蛋白。对表达条件进行优化，发现在37℃、口TG浓度0．6mmoFL的条件下诱导5垢，CBS蛋白的表达量较多，该蛋白主要以包涵体形式存在。关键词：溶藻弧菌；胱硫醚廿合成酶；基因克隆；

3、生物学信息分析；原核表达中图分类号：Q75文献标志码：A文章编号：1673—9159(2016)03-0020-09Cloning，BioinformaticsAnalysisandProkaryoticExpressionofCystathionine-p-SynthaseGenecbsfromVibrioalginolyticusCHENShu-he，CHANGYun-sheng，LIUHui-hui，ZHOUWei，DINGYu(FisheriesCollegeofGuangdongOceanUniversity／／GuangdongProvincialKeyLaboratory

4、ofPathogenicBiologyandEpidemilogyforAquaticEconomicAnimals，Zhanfiang524088，China)Abstract：Thecystathionine-fl-synthasegenecbsfromVibrioalginolyticuswascloned,andthentheCBSproteinWaSanalyzedbybioinformaticsmethod．Theresultshowsthattheopenreadingframe(ORF)ofgenecbsis1095bpandencodes364aminoacids．T

5、heaminoacidsequencealignmentshowsthatthereexiststhehigherhomologyoftheCBSbetween矿alginolyticusandotherVibrios，withcloserelationstothoseof矿parahaemolyticuswitllabout98％homology．ThesecondarystructureofCBSproteinisatypicalfoldof“Ⅱ+p”withoutsignalpeptideandtrammembrane．Aprokaryoticexpressionvector(p

6、GEX—cbs)isconstructedtoexpressrecombinantprotein，andthenthegenecbsisexpressedllighlyintherecombinantEcoliBL21，withapproximately66．4kuexogenousproteinsinSDS-PAGE．TheoptimalinductionconditionsshowsthatitcanachievehigherproteinexpressionswheninducedbyO．6mmol／LofIPTGat37℃for5h．Keywords：Vibrioalginol

7、yticus；cystathionin昏8-synthase；genecloning；bioinformaticsanalysis；prokaryoticexpression溶藻弧菌(IObrioalginolyticus)隶属于弧菌科弧菌属，可引起人类和水产养殖动物患病‘1。21。溶藻弧菌病的暴发对鱼、虾及贝类等水产养殖动物危害极大【3．5】，给水产养殖业所造成的损失难以收稿日期：2015_ol-08基金项目：广东省自然科学基金(2014A0