溶藻弧菌HY9901血红素结合蛋白HutB的原核表达及纯化.pdf

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1、第34卷第3期2014年6月广东海洋大学学报Jo啪a1ofGuangdongOceaIlUniVers时V．01．34No．3Jun．2014溶藻弧菌HY9901血红素结合蛋白HutB的原核表达及纯化、薛丽丽1’2一，庞欢瑛1’2’3，黄郁葱1’2⋯，吴灶和2'3一，简纪常1’2一，周泽军1’2'3(1．广东海洋大学水产学院，，2．广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，，3．广东省水产经济动物病害控制重点实验室，广东湛江524088；4．仲恺农业工程学院，广东广州510225)摘要：为探究溶藻弧菌(所6砌口垃加oO砸c埘)HY9901血红素结合

2、蛋白HutB作为疫苗候选抗原的可能性，采用PCR方法扩增矿劬；f聆D纱ffc淞HY9901^z，馏基因全长序列，克隆到pMDl8．T载体，经双酶切、连接后，定向插入到pET_28a(+)中，构建原核表达载体pET_HutB，转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。SDs．PAGE验证后，优化诱导表达条件和纯化条件，并进行w色stem．blot分析。结果表明，HutB蛋白在Eco，f中诱导表达的最优条件：0．4mmo儿IPTG，37℃诱导4h，表达的蛋白分子量与预期大小相符，主要以包涵体的形式存在，300mmol／L咪唑洗脱时效果最佳，能与鼠抗

3、His．tag单抗特异性结合。关键词：溶藻弧；^“倡基因；原核表达；优化；纯化中图分类号：s941文献标志码：A文章编号：1673—9159(2014)03．0047．05ProkaryoticExpressionandPuri行cationoftheRecombinantHemin-BindingProtein(HutB)of励，如口铷D纱自．c以sstrainHY9901XUEL汕1’2P，PANGHuan—yin91，2r，HUANGYu-con91’2r，WUZao．he2，3'4，JIANJi．chan91，2一，ZHOUZe．junl，2，3(

4、1．凡，厅P一酷c0，，e：妒Q厂G”口愕如略Dc阳疗确fVg坶f纱，劢口形f口馏524088，国fn口；2．G甜口馏面喀ProvincinlKI虿Lnborntory可PnthogenicBiologynndEpidetnilogy如rAqucnicEconomicAnimnts，Z矗删f口孵524088，劬f玎口；3物三日6DmfD杪Q厂D西e伽eCD门加盯f馏声，．49甜口加眈伽D肌fc彳疗砌口瓜∥(妇nngdo玎gHi曲erEdncalionInstntlttonS，Zhn吩i册gs24锁撼，Chin％4．zhongkaiUniverSil)，西彳

5、l呈7．fc“，胁，譬口玎d上均扬PP一，曙，G“口停办D”510225，(协f玎口)Abstract：ToinvestigatetheprokaryoticexpressionandexploFethepossibilitiesasavaccinecandidateantigensofHutB矗DmⅣ口红玎。纱f记淞HY9901，tlle厅材培genewasclonedbyPCR，andthenfollowedbydigestion，coIlllection，meprokaDroticeXpressionvectorpET_HutBwascons仃u．c

6、ted锄∞ughdirectionalinseningintopET-28“+)，then昀nsfo加edinto西c加廊办妇∞办BL2l(DE3)with口TGinduction．ARerverificationofSDS．PAGEtheinductede)【pressionandpurificationconditionswasoptiIIlized鼬er．Theresultsshowedthat：TheoptimizationconditionofinducibleexpressionforHutBprotein抽E∞矗wasoptimazedat3

7、7℃for3ho娜，w主也0．4mmol／LIPTGT11ebestelutionconcentrationofiIIlidazolewas300mmol／L，andmeeXpressedproteinexistedinthefo吼ofinclusionbody．TherecombinantHutBmsionproteincouldbecoIIIbinedwithmouseami—His—T奴antibo“收稿日期：2014．03．20基金项目：国家科技支撑计划(2012BADl7802、2012BADl7803)：广东省自然科学基金(s201304001

8、4562)第一作者：薛丽丽(1989一)，女，硕士研究生，研究方向