基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIV p24安培免疫传感器.pdf

《基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIV p24安培免疫传感器.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第11期2010年11月ChineseJournalofAnalyticalChemist~1556～1562DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01556基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIVp24安培免疫传感器干宁罗乃兴李天华郑磊倪敏君‘(宁波大学新型功能材料及其制备科学国家重点实验室基地，材化学院，宁波315211)(南方医科大学检验科，广州410003)(宁波出入境检验检疫局保健中心，宁波315200)摘要在多壁碳纳米管(MWNTs)表面固定FeO(核)／Au(壳)纳米微

2、粒(GMP)，使其具有超顺磁性，包被p24抗体(antip24)，制得检测探针(MWNTs—GMP／antip24)；在磁场作用下将此探针吸附于Ⅳ，Ⅳ一双(2一羟基苯亚甲基)邻苯二胺合铜(CuRb)修饰的碳基丝网印刷电极(SPCEICuRb)表面，制得了免疫传感电极(SPCEICuRb／MWNTs—GMP／antip24)。当此电极在含p24样本中于室温下温育15rain后，随p24浓度的增加在电极表面生成的免疫复合物增加，导致CuRb对HO的催化还原电流下降。在含5mmol／LH：0的PBS(pH7．0)中和一300mV下，催化还原电流降低值AIo

3、与p24浓度在0．6—160g／L呈线性关系；检出限为0．32g／L(30-)。将其用于实际样品检测，结果与标准EILSA方法一致。由于MWNTs—GMP／antip24具有超顺磁性，并可以显著提高电极比表面积及antip24负载量，而CuRb代替易失活的HRP酶，使得该传感器灵敏度和稳定性俱佳，电极表面可更新，可用于艾滋病人血清中p24筛测。关键词Ⅳ，Ⅳ一双(2羟基苯亚甲基)邻苯二胺合铜；丝网印刷电极；碳纳米管；Fe，0(核)／Au(壳)；HIV衣壳蛋白p24；无酶型安培免疫传感器1引言HIV衣壳蛋白p24(简称p24)在艾滋病感染早期诊断中起着不

4、可替代的作用⋯。其检测方法包括酶联免疫分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、免疫荧光分析(IFA)等。其中ELISA法最常用，但灵敏度不高，“窗口期”长，假阳性率高。后两种方法灵敏可靠，但所需仪器昂贵，操作复杂，不适宜于基层医疗部门作p24现场筛查。安培免疫传感器具有极高的灵敏度和特异性，适合于构建痕量p24的快速检测技术，有望缩短艾滋病“窗口期”并降低检测成本。但目前该类传感器在临床上应用还存在一些不足：一是通常采用酶标抗体结合在电极表面，通过酶催化反应(如HRP酶对H：O催化)引起测试体系电信号变化进行测定。由于酶昂贵且固定于电极表面易失活

5、，导致电极使用寿命降低；二是当电极上的抗原／抗体发生结合后生成物很难除去，其表面无法更新，测定数次后需要重新修饰，费时繁琐；三是常见的电极材料(如金、玻碳等)价格昂贵，制备成本高。Ⅳ，Ⅳ一双(2羟基苯亚甲基)邻苯二胺合铜(CuRb)具有催化HO的特性，可替代HRP酶。碳纳米管和纳米金常被用于固定抗原／抗体分子而制备生物探针，进而将其修饰到电极表面，可获得高灵敏度、检出时间显著缩短的安培免疫传感器。闵丽根等¨采用纳米金、多壁碳纳米管等合成了纳米复合物，用其固定癌胚抗原(CEA)抗体制得了灵敏度和稳定性俱佳的CEA传感器，但该类传感器仍无法实现更新。Fe

6、，O／Au组装型金磁纳米微粒(简称GMP)兼具FeO的超顺磁性和胶体金的生物相容性，可用于抗体固定并易于实现磁性分离，近年来在生化分析中应用日渐广泛⋯'J。如合成MWNTs／GMP复合粒子(MWNTs．GMP)并包被p24抗体(antip24)，由此制备的“磁性碳纳米管探针”可方便地在外磁场作用下在电极表面吸附解吸，获得的免疫传感器可再生，由此可大大简化检测探针在电极上修饰过程。丝网印刷碳电极(SPCEs)可批量生产，具有成本低、电极面积可控等突出优点，非常适合于构建廉价的一次性安培免疫传感器。本研究采用CuRb修饰，在SPCEs电极上构建了HO，传

7、感器(SPCElCuRb)，并合成了MWNTs．2010-03-03收稿；2010-06-09接受本文系国家自然科学青年基金(No．20805024)，浙江省自然科学基金(Nos．Y20805024，2008C50012)，广东省科技计划项目(No．2008A050200006)和宁波大学王宽诚基金资助项目E—mail：ganning@nbu．edu．crl第11期干宁等：基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIVp24安培免疫传感器GMP，用以包被p24抗体；通过外加磁场将MWNTs—GMP／antip24探针吸引到SPCElCuRb表面，制备了电

8、极表面可更新的磁控HIVp24无酶型一次性安培免疫传感器，并用于HIV患者血清检测。2实验部分2．1仪器与试