微生物的培养与利用专题复习.doc

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1、微生物的培养与利用2011年北京市高考考试说明中的要求类型微生物的培养与利用具体内容微生物的培养与分离某种微生物数量的测定培养基对微生物的选择作甩剂用微生物进衽发酵来正产特定的产物发酵过程中亚硝酸盐含量的测定基础知识一、微生物简介（一）概念及类群：指的是结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。主要包括：1、细菌：（1）形态：（2）繁殖方式：（3）菌落：在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是的重要依据。2、真菌：（1）种类：（2）

2、繁殖方式：二、培养基（一）概念：人们按照微生物对营养的不同需求,配制岀供其生长繁殖的营养基质叫培养基。I、培养基的类型及用途（1）按物理状态分：（2）按成分分:（3）按功能分:2、培养基的营养成分：不管哪种培养基，…般都含有、、、等营养物质，另外述需要满足微生物生长对、、以及特殊营养物质（如维生素）的要求。配制固体培养基，还需加入凝固剂。三、无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止的方法。要注意以下儿个方而：%1对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。%1将用于微生物培养的器皿、接种

3、用具和培养基等器具进行灭菌。%1为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。%1实验操作时应避免i_L经灭菌处理的材料用具与周围的物品柑接触。1、消毒与灭菌的区别：（1）消毒：指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表而或内部的部分微生物（不包括芽泡和袒子）。（2）灭菌：用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物（包括芽袒和抱子）。2、常用的灭菌与消毒的方法：四、微生物实验室培养的基本程序1、配置培养基2、培养基及器具灭菌3、倒平板4、接种5、恒温培养6、菌种保存实验一大肠杆菌的培养和分离一

4、、制备LB培养基（用于培养细菌）的基本步骤:1、计算2、称量3、溶化4、调pH5、分装灭菌6、倒平板7、无菌检査倒平板操作的步骤：%1将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌而上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左于•拔出棉塞。%1右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。%1用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶屮的培养基（约10〜20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。%1等待平板冷却凝固，大约需5〜lOmino然后，将平板放置，使培养1111盖在下、1111底在上。二、大肠杆菌的纯化纯化大

5、肠杆菌的接种方法有：和日的是：使聚集在-起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的,以便于纯化1、平板划线法扌作步骤:%1将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。%1在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。%1将试管口通过火焰。%1将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一•环菌液。%1将试管通过火焰，并塞上棉塞。%1左手将皿盖打开i条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。%1灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在

6、三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。%1将平板倒置放入培养箱中培养。问题讨论：为什么在操作的第i步以及每次划线Z前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线?在作第二次以及其后的划线操作是赤什么总是从上一次划线的末端开始划线?2、稀释涂布平板法操作步骤:系列稀释操作：%1将盛有9mL水的6支试管灭菌，编号心、心、101010106o%1用移液管吸取ImL培养的菌液，注入编号为1(?试管中，并吹吸3次，使之混匀

7、。%1从IO】倍液中吸取ImL菌液注入到编号为IO?试管内吹打均匀，获得l(f倍液。依此类推。1mL9mLzK稀释液U9mL水稀释液1049mL7K稀释液9mL水稀邸液9mL水稀释液9mL水稀释液注意：移液管需耍经过灭菌。操作时试管口和移液管应在离火焰1〜2cm处。涂布平板操作：%1将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。%1取少量菌液，滴加到培养基表面。%1将沾有少量酒精的涂布器在火焰丄引燃，待酒精燃尽后，冷却8〜10s。%1用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表而。三、微生物的恒温培养将接种后的培养基和一个未接种的

8、培养基都放入37°C恒温箱中，培养12和24小时后，分别观察记录结果。注：细菌-•般在3O-37°C下培养1・2天，放线菌一般在25・28°C下培养5・7天霉菌一般在25-28°C下培养3-4天。四、菌种的保存长期保存：低温临时保存：恒温无菌环境实验二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数—、筛选菌株］、原理、人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH、光照、対线、抗生素等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。2、方法：利