金银花花器官实时荧光定量PCR内参基因的筛选.pdf

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1、山西农业科学2017，45（4）：514-517JournalofShanxiAgriculturalSciencesdoi:10.3969/j.issn.1002-2481.2017.04.06金银花花器官实时荧光定量PCR内参基因的筛选刘霞宇，陈亮，乔永刚，宋芸，王金胜（山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801）摘要：为了筛选金银花花器官基因表达分析的适宜内参基因，试验以金银花花器官6个时期为材料，选取金银花的9个候选内参基因Lonja.ACT11，Lonja.ACT2/7，Lonja.G6PD，Lonja.GAPDH，Lonja.MTP，Lonja.TUA，

2、Lonja.UBQ10，Lonja.EF1A，Lonja.UBC，利用qRT-PCR技术及GeNorm，NormFinder软件对它们的表达稳定性进行分析评价。结果表明，Lonja.ACT2/7和Lonja.G6PD在金银花花器官生长的不同时期表达水平较稳定，运用qRT-PCR研究金银花花器官基因表达时可选用Lonja.ACT2/7和Lonja.G6PD组合作为内参基因。关键词：实时荧光定量PCR；金银花花器官；内参基因中图分类号：S567.7＋9文献标识码：A文章编号：1002-2481（2017）04-0514-04SelectionofReferenceGenes

3、byqRT-PCRinFlowerOrganofLonicerajaponicaThunb.LIUXiayu，CHENLiang，QIAOYonggang，SONGYun，WANGJinsheng（CollegeofLifeScience，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China）Abstract：ThestudyaimedtoselectstableandoptimalreferencegenesforgeneexpressionanalysisinflowerofLonicerajaponicaThunb.,tak

4、ing6periodsofLonicerajaponicaThunb.asmaterials.AtotalofninereferencegenesincludingLonja.ACT11,Lonja.ACT2/7,Lonja.G6PD,Lonja.GAPDH,Lonja.MTP,Lonja.TUA,Lonja.UBQ10,Lonja.EF1A,Lonja.UBCwerecomparedbyqRT-PCR.ThestabilityofexpressionoftheninereferencegeneswereevaluatedbyGeNormandNormFindersof

5、tware.TheresultsshowedthatLonja.ACT2/7andLonja.G6PDwerethemostsuitablereferencegenesamongdifferentperiodsofflowerorgan,Lonja.ACT2/7andLonja.G6PDwereusedasthereferencegeneinthestudyofgeneexpressionofhoneysuckleflowerorgansbyqRT-PCR.Keywords：qRT-PCR;flowerorganofLonicerajaponicaThunb.;refe

6、rencegenes[1][8][9]基因表达在生物研究的许多领域都非常重要。GeNorm和NormFinder。相比于传统的转录组分析，实时荧光定量PCR（qu-金银花（LonicerajaponicaThunb.）又名忍冬，为[2]antitativereal-timePCR，qRT-PCR）是检测mRNA忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物，根据金银[3]最可信的方法。其具有高灵敏性、高通量以及特异花花色的变化，可以将金银花开花过程分为米蕾[4][10]性高、动态范围广等优点，但同时也存在一些困期、三青期、二白期、大白期、银花期、金花期。金难，最重要的就是内参基因的

7、标准化。银花商品以花蕾为佳，其性甘寒、气芳香，在中医药在进行植物qRT-PCR研究时通常选用管家基学中多作为宣散风热、清解血毒等配方，是一种常[11]因作为内参，比如肌动蛋白（actin，ACT）、微管蛋白见的中医药学药用植物。另外，金银花可作为食（tublin，TUA，TUB）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyc-物，也普遍被认为是一种健康饮品，所以使得金银[12]eraldehyde-3-phosphatedehydrogenase，GAPDH）、核花在中草药市场的商业价值快速上升。糖体RNA（ribosomalRNA，18srRNA，