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《高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织TLR4和MyD88mRNA的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、高脂高糖饮食诱导的耳E酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织TLR4和MyD88mRNA的表达［摘要］目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)在高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织中的表达及其意义。方法选取SD大鼠20只，随机分为两组，模型组SD大鼠给予高脂高糖饲料喂养，正常组给予普通饲料喂养，10周末分别进行如下检测：①计算肝指数；②HE染色，光镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变;③应用RT-PCR法检测大鼠肝组织TLR4、MyD88mRNA的表达。结果模型组的肝指数较正常组明显增加(P<0.
2、01);模型组的NAFLD活动度计分与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01);模型组大鼠肝组织TLR4和MyD88的mRNA表达水平与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论持续10周的高脂高糖饮食喂养可以诱导NAFLD大鼠模型，模型组大鼠肝组织TLR4mRNA和MyD88mRNA表达升高，在肝细胞炎症改变中起重要作用。［关键词］非酒精性脂肪肝；大鼠；Toll样受体4;髓样分化因子88近年来非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)的发病率逐渐升高,且呈年轻化趋势。胡卫等
3、［1］对武汉大学医学院教职工体检的调查硏究发现，NAFLD总患病率达到20.7%，其具体发病机制尚未完全明确,但大量研究表明胰岛素抵抗、炎症反应、脂质代谢异常在该病的发生发展中起着重要作用［2］。目前硏究表明,Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)与感染信号的识别及转导和机体的损伤密切相关,将感染和炎症、组织损伤联系起来［引。Toll样受体4(Tolllikereceptor4ZTLR4)是内毒素识别受体,目前已知TLR4介导的信号转导包括髓样分化因子88(myeloiddifferentiationfactor
4、88,MyD88)依赖性和非依赖性途径。MyD88依赖性途径主要介导核因子・kB(nuclearfator-KB,NF・kB)活化、细胞因子的产生［4］。本文通过硏究TLR4、MyD88在高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis,NASH)大鼠肝组织中的表达，旨在探讨TLR4、MyD88在NASH炎症反应中的作用。1材料与方法1.1非酒精性脂肪性肝炎动物模型的建立健康雄性Spraque-Dawley大鼠20只，体重180~225g,清洁级z购买于上海斯菜克实验动物有限公司［许可证
5、号:SCXK(沪)2008-0016］,饲养于浙江中医药大学动物实验中心。20只SD大鼠随机分为正常组(予普通饲料喂养)10只及模型组10只(予以高脂高糖饲料喂养)；于第10周处死正常组10只大鼠及模型组10只大鼠，HE染色，光镜下观察正常组和模型组大鼠肝组织的病理改变，以证实大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis,NASH)模型成功建立。实验动物每笼5只，分笼饲养，均自由饮水和进食，(20±2)°C明暗各12h,均连续10周。1.2标本采集第10周末当晚两组大鼠禁食不禁水，次日晨空腹腹腔注
6、射麻醉z心脏采血用于测走生化指标和细胞因子；分离整个肝脏称重，在肝右叶切取数块肝组织,装入冻存管,投入液氮中保存,进入实验室后移入£0工冰箱中保存z用于提取总RNAz以检测肝组织中TLR4、MyD88的mRNA表達。1.3病理组织学检查常规HE染色，光镜下观察大鼠肝细胞脂肪变性程度、气球样变性、小叶内炎症程度以评定NAFLD活动度计分（NAFLDactivityscorezNAS）z脂肪肝病理组织学诊断参考中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组〃非酒精性脂肪肝诊断标准〃⑸。根据肝小叶内脂肪变的肝细胞数将脂变程度量化:0分（肝小
7、叶内＜5%肝细胞脂肪变）、1分（肝小叶内5%~33%肝细胞脂肪变）、2分（肝小叶内34%~66%肝细胞脂肪变）、3分（肝小叶内〉66%肝细胞脂肪变）。肝小叶内炎症（20倍镜计数坏死灶）计分：0分（无坏死灶）、1分（＜2个坏死灶）、2分（2~4个坏死灶）、3分（＞4个坏死灶）。肝细胞气球样变程度计分：0分（无气球样变）、1分（少见气球样变）、2分（多见气球样变）。NAFLD活动度计分（NAFLDactivityscore,NAS）为肝细胞脂肪变+小叶内炎症+肝细胞气球样变，NAS小于3分则不考虑NASH,NAS大于4分则可诊断NASH
8、z介于两者之间为NASH可能。1.4RT-PCR检测TLR4、MyD88mRNA在NASH大鼠肝组织中的表达141总RNA提取从超低温冰箱中取出冰冻的组织，约为100mg,迅速转移至用液氮预冷的研钵中,用硏杵硏磨组织，直至硏磨成粉末状
