丹参对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织nf

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1、丹参对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织NF随着饮食结构和生活习惯的改变，肥胖及代谢综合征的流行，非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholicsteatcHepatitis，NASH)的发病率呈日渐升高趋势，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，在某些地区甚至超过病毒性肝炎。目前西药疗效并不十分理想，中医药在治疗NASH方面的疗效日益受到重视。本研究通过观察丹参注射液对NASH大鼠肝组织NF-kB、TNF-a表达的影响，探讨丹参防治NASH的可能作用途径，为治疗NASH筛选有效药物提供实验依据。1材料与方法1.1实验动物45只SD雄性大鼠购自中山大学动物实验中心大鼠于清洁动物室饲养

2、，普通饲料喂养，自由饮水。1.2造模方法45只SD大鼠随机分为4组：正常组、模型组、丹参治疗组和西药对照组，除正常组大鼠正常饮食外，其余各组大鼠均采用高脂饲料喂养：普通鼠饲料基础上加2%胆固醇和13%猪油，分笼饲养，自由摄食与饮水，每日更换饲料和水1次，饲养16周。NASH造模标准参照范建高等的方法[1]。1.3给药方法西药对照组每天予还原型谷光甘肽钠溶液，10ml/kg腹腔注射，丹参治疗组大鼠每天予丹参注射液，m/kg腹腔注射（丹参治疗量及谷胱甘肽钠治疗量均相当于成人用量的20倍），正常组和模型组予等量生理盐水腹腔注射，连续16周。1.4检测项目及方法1.4.1免疫组织化

3、学检测肝组织TNF-a表达按照SP免疫组织化学试剂盒说明书进行免疫组织化学检测，用已知阳性片作为阳性对照，PBS缓冲液取代一抗作为阴性对照。TNF-a蛋白阳性表达表现为细胞质呈棕褐或棕黄色，选择多个具有代表性的高倍视野，采用IPP软件计算平均光密度值。试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。1.4.2电泳迁移率改变分析检测大鼠肝组织NF-kB活性参照核心试剂盒说明书，按下列顺序操作：①提取并定量核蛋白探针标记纯化；%非变性聚丙烯酰胺凝胶配制结合反应；©0.5XTBE电泳液，予恒压180V电泳90min;⑥剥离胶片，电灯烤干，磷屏曝光20h;⑦应用图像分析软件BandScan

4、5.0对所形成的特异性产物条带计算积分光密度分析，以丹参组与正常对照组的结合条带的IA比值表示丹参治疗组的相对结合活性。试剂盒购自上海碧云天生物技术公司。1.5取材造模第16周末，各组大鼠禁食不禁水12h，予2%戊巴比妥钠麻醉后沿腹中线开腹，快速取出肝脏，检测相关指标。1.6统计学处理采用SPSS140软件进行统计学处理，计量资料以无士s表示，P〈0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肝组织免疫组织化学TNF-a的表达TNF-a主要表达于细胞浆，着色为棕褐色或棕黄色。正常肝组织中着色很淡，几乎不表达。模型组TNF-a阳性表达较正常组明显增强（P〈0.01)，与模型组比，丹

5、参治疗组TNF-a表达明显减低（P〈0.01)。见表1。2.2EMSA检测各组肝组织NF-kB活性通过EMSA实验发现，模型组肝组织NF-kB较正常组明显升高（P〈0.01)，丹参干预后肝组织NF-kB明显降低（P〈0.01)。见图1、2。图2各组与正常组的NF-kB特异结合的条带IA比值３讨论非酒精性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）是一种遗传－环境－代谢应激相关性肝病，其发病机制非常复杂，目前尚未完全明确。Ｄａｙ等提出的“二次打击”学说以脂质代谢异常、细胞因子、氧化应激、脂质过氧化被广泛接受［２－３］。中医学无ＮＡＳＨ这一病名，根据其症状及临床特点，将其归为“胁痛”、“积聚”、“痞

6、满”、“痰证”、“湿阻”等范畴。该病最早记载于《难经》：“肝之积，名曰肥气。”故也称肥气病，指体内过多肥脂之气蓄积于肝脏。中医认为ＮＡＳＨ形成外因是嗜食肥甘厚味，内因是肝胆疏泄失常，脾失健运，导致气滞痰阻，久而成瘀，痰瘀互结而成。现代药理研究已经证实丹参具有促进脂质代谢，抗脂质过氧化、清除自由基、抑制氧化应激，减轻肝细胞变性坏死，促进肝细胞再生等作用。ＮＦ－κＢ是一种前炎性递质基因核因子，通过调控基因转录来调控炎症反应、免疫应激反应、细胞黏附及凋亡，特别在表达炎症基因中占有枢纽性位置［７－８］。ＴＮＦ－α是ＮＡＳＨ发病的独立危险因素，在单纯性脂肪肝转化为ＮＡＳＨ过程中起着关

7、键作用［９－１０］。研究表明，ＴＮＦ－α与胰岛素抵抗密切相关［１１－１２］，并通过减少外周组织脂肪分解，促进肝细胞甘油三酯合成与聚集，而引起脂质在肝组织异常蓄积［１３－１４］。ＴＮＦ－α通过激活ＩＫＢ激酶β（ＩＫＫβ）使Ｉκβ降解，从而活化ＮＦ－κＢ，ＮＦ－κＢ活化后即启动多种促炎因子基因，如ＴＮＦ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－６、ＩＬ－８、黏附因子、趋化因子等转录，这些细胞因子不仅可以直接诱导肝细胞炎症损伤，还趋化炎性细胞迁移，放大炎症反应，共同参与肝组织炎症、肝纤维化等病理生理过程［１５－１８］。除调控与炎症反应相关基