资源描述：
《双特异性抗体》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、ISSN1007-8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmunol)2003,19(5)519·综述·文章编号:1007-8738(2003)05-519-03双特异性IgG的研究进展方 敏,黄华 (中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京100101)关键词:双特异性IgG;knobs2into2holes;二硫键;盐键而应用相同的轻链来构建BsIgG彻底解决了轻链的错配问题。中图分类号:Q511 文献标识码:A2.1 改造抗体重链使形成异源二聚体 人IgG分子中蛋白2蛋白相互作用最强的部位是重链CH3区域,而CH2区域是通 传统的免疫球蛋白只能结合单一特异性的
2、抗原分子,而过其相连的碳水化合物发生相互作用的。CH3区域决定了抗双特异性抗体的两个抗原结合位点具有不同的特异性,能够体重链间的交联,因此,改造CH3区域,可以使之更易于形成结合不同的抗原分子。双特异性抗体在生物医学领域特别是异源二聚体。改造的指导原则是互补结合。改造的策略包在肿瘤免疫治疗方面已取得了较大成就。鉴于用传统的方法括:knobs2into2holes、链间二硫键和盐键。①knobs2into2holes:很难大量制备符合临床要求的双特异性抗体,近年来,双特knob突变是在第1个CH3区域中用1个大侧链氨基酸取代1[6]异性抗体片断制备技术进展很快。然而,在双特异性抗体的个小侧
3、链氨基酸得到。例如:T366Y。而在第2个CH3区域临床应用中,许多需要其具备完整的IgG形式。因为这种形中相互补位置由1个小侧链氨基酸取代1个大侧链氨基酸引[6]式含有包括CH2区域和CH3区域的Fc片段,可以提供较长的入1个hole,例如:Y407T。由于空间结构互补,第1个CH3血浆半寿期及引发效应功能。因此,随着高效制备双特异性区域中的knob插入到第2个CH3区域中的hole而形成异源二IgG(BsIgG)新技术的日臻成熟,BsIgG的应用研究将会进一步聚体。②链间二硫键:经过分子模拟后,选择合适的氨基酸深入。残基突变为半胱氨酸,通过两条链上的半胱氨酸形成CH3域间二硫键而介导
4、形成异源二聚体。③盐键:在CH3区域的相1 制备双特异性抗体的传统方法交面,分别将两条链上相对应的氨基酸残基突变成带相反的早在单克隆抗体(mAb)出现前,人们就已经知道双特异电荷,这样通过电荷之间的相互作用,使两条链异源二聚化。[7]性抗体。最早具有双特异性的抗体出现在1961年[1],是将两Knobs2into2holes突变可以用噬菌体展示技术进行优化。种不同特异性的多克隆抗体的Fab片断混合物经过温和氧化先在1条CH3链上产生1个CH3knob突变(T366W)。CH3hole而制备的。在体外用化学交联剂可将两种不同特异性的mAb突变库通过对另1条CH3链上的366,368和407
5、位氨基酸残或抗体片断通过二硫键或硫醚键连成双特异性抗体[2]。该方基的随机突变产生。这3个氨基酸残基与第一条链上的knob法可快速、大量制备双特异性抗体,但在交联过程中抗体时有突变相对应。CH3knob突变与1个flag肽融合,而CH3hole突失活,而且难于保证产物的匀质性。变库与M13基因III融合。噬菌体展示的稳定CH3异二聚体广泛应用的双特异性抗体生产方法是在二次杂交瘤中共可以用抗flag抗体选择性回收。其中的1个异二聚体,表达两种不同特异性的mAb[3〗。但是,共表达两种不同的T366W2T366’S:L368’A:Y407’V的tm为69.4℃,比以前设计的mAb会产生9种
6、不需要的轻、重链配对产物,有活性的BsIgGT366W2Y407’A的tm高4℃,比野生型同源二聚体的tm低11℃。用含有该突变的CD42IgG和抗CD3重链以及抗CD3轻大约仅占10%～50%。而且,从这些结构相似的抗体中分离链共转染293细胞,则可产生大于85%的抗体/免疫黏附素纯化目的蛋白也费时费力。尽管如此,到现在,已有至少5(Ab/IA)异二聚体。种由二次杂交瘤所分离纯化的BsIgG或酶解的BsF(ab′)2在进[4]同时,经过分子模拟后,6对CH3区域的氨基酸残基选择行小规模的临床实验。用作半胱氨酸置换。这些氨基酸残基对位于CH3区域相交面上,靠近CH2区域(K392C和D3
7、99’C,V397C和T394’C),或者2 制备BsIgG的新途径[5]远离CH2区域(S354C和L351’C,S354C、E356C、E357C和1998年,Merchant等改进了制备BsIgG的方法,基本解Y349’C)。而经噬菌体库筛选出来的knobs2into2holes突变决了抗体轻、重链的错配。应用基因工程的方法改造重链,使(T366W/T366’S:L368’A:Y407’V)位于CH3区域相交面中心。之更倾向于
