双特异性抗体与抗体融合蛋白

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1、双特异性抗体2双特异性抗体概述构建策略应用3概述双特异性抗体：抗体两个结合点表现为不同的特异性，即分别结合不同表位。如，一个结合靶细胞（如肿瘤细胞），另一结合药物或免疫效应细胞（如蓖麻毒素、抗癌药物、细胞毒性细胞）4双特异性抗体56双特异性抗体的功用：提高疗效，减少副作用。主要用于靶向治疗。7构建策略双特异性抗体的靶标一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞T细胞TCRCD3CD28构建策略双特异性抗体的靶标一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞吞噬细胞/APCFcγR、CR9构建策略双特异性

2、抗体的靶标一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞NK细胞FcγR、CD5610双特异性抗体的效应靶效应细胞靶分子效应T细胞TCR/CD3,CD2杀伤肿瘤细胞NK细胞FcγRIII,CD44,CD56,CD38杀伤肿瘤细胞病毒感染细胞中性粒细胞FcγRI,CR3,FcαRI杀伤肿瘤细胞病毒感染细胞单核巨噬细胞FcγRI,CR3,FcαRI杀伤肿瘤细胞病毒感染细胞树突状细胞FcγR抗原递呈红细胞CR1免疫粘附11构建策略双特异性抗体的构建方法杂化杂交瘤技术将具有某种特异性（如抗瘤细胞）的McAb细

3、胞株与具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白）的小鼠脾细胞进行融合，即产生出杂化杂交瘤细胞株的二价瘤体。12杂化杂交瘤技术产生的双特异性抗体13杂化杂交瘤分泌的抗体形式保持原特异性抗体分子：L1H1-H1L1，L2H2-H2L2重链特异性相同的配对抗体分子：L1H1-H1L2，L1H2-H2L1L2H1-H1L2，L1H2-H2L2重链、轻链特异性不同的配对抗体分子：L1H1-H2L2，L1H2-H1L2L1H1-H2L1，L2H2-H1L214只有L1H1-H2L2才是所需的双特异性抗体15杂化杂交瘤方

4、法的不足产量低，仅占10%产物需筛选，费时费力瘤株不稳定16构建策略双特异性抗体的构建方法化学交联法Nisonoff和Rivers最早开始研究化学交联无需经过细胞融合，比较简便易行。通常利用重链与轻链这间的二硫链经还原和再氧化，将两种不同特异性抗体的半分子结合在一起。或用双功能交联剂，如邻苯酸酯等，把两个抗体半分子交联在一起。17化学交联的双特异性抗体18构建策略双特异性抗体的构建方法化学交联法用于制备双功能抗体的McAb可以是完整分子，也可是经胃酶水解获得F（abˊ）2片段。后者在减少鼠源免疫

5、原性方面，效果较好。19构建策略双特异性抗体的构建方法基因工程技术利用分子生物学技术设计产生双功能抗体常见有四种构建形式，多为小分子抗体。20末端半胱氨酸残基（Cys）共价交联在两种scFv分子C末端分别带上自由的Cys，通过常规二硫键共价交联，形成双特异性抗体VLAVHALCysVLBVHBLCys-S-S-21单链双特异性抗体将两种scFv分子基因用linker连接在一起，然后表达形成双特异性抗体VLAVHALVLBVHBLL22微型双特异性抗体利用专门二聚化结构将两种scFv分子连接在一起

6、，形成双特异性抗体如利用fos和jun基因的亮氨酸拉链序列：VLAVHALfosVLBVHBLjun23双体型双特异性抗体将两种不同抗体的VH和VL用较短的linker连接形成两种不同单链，当它们共表达时，其相互间连接在一起，形成双特异性抗体1993，Holliger24双特异性抗体的应用免疫诊断肿瘤放射显影肿瘤药物杀伤肿瘤的免疫杀伤乳腺癌、淋巴母细胞白血病、神经胶质瘤25抗体免疫偶联物26抗体免疫偶联物概述小分子药物与抗体偶联物毒素及大分子多肽药物与抗体偶联物应用27概述抗体免疫偶联物将单抗与

7、“弹头”药物偶联在一起，以提高药物作用的特异性，主要用于肿瘤治疗。如，Mylotarg—抗CD33单抗偶联加里奇霉素，治疗老年人急性髓细胞性白血病，2000年上市。28与单抗偶联的常用“弹头”药物类别名称植物毒素蓖麻毒素，相思豆毒素，皂角苷微生物毒素绿脓杆菌外毒素，白喉毒素抗代谢药物氨基蝶呤，甲氨蝶呤，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶，5-氟脱氧尿苷蒽环类药物阿霉素柔红霉素吗啉阿霉素烷基化药物顺铂苯丙氨酸氮芥丝裂霉素C抗有丝分裂药物长春花碱秋水仙碱鬼臼毒素抗生素博莱霉素加里奇霉素平阳霉素29小分子药物与抗

8、体偶联物一个单抗可偶联一个至数十个小分子药物。抗体分子中的多个基团可以用于连接，如巯基，氨基，羟基，胍基，羧基，糖基等。30小分子药物与抗体偶联物直接偶联物将药物与单抗直接连接在一起不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。2-亚胺四氢噻吩(2-IT)可在具氨基的化合物上引入巯基31小分子药物与抗体偶联物直接偶联物将药物与单抗直接连接在一起不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。SPDP(N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯)可将巯基引入抗体如，阿霉素与抗子宫内膜腺癌单抗偶联，效果提高5