南瓜多糖的提取及纯化

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1、南瓜多糖的提取及纯化摘要：为开发和利用南瓜多糖，采用纤维素酶法提取南瓜多糖；利用单因素试验考察了纤维素酶的浓度、时间、温度、pH值对南瓜多糖提取率和纯度的影响，并通过紫外光谱和红外光谱对样品进行了分析.结果表明：该法提取南瓜多糖的最佳反应条件为：酶浓度0.5%，时间120min，温度5(TC，pH值5.2.在最佳条件下，南瓜多糖的提取率为4.9%,多糖的纯度为52%.紫外光谱分析表明：样品在217nm有多糖的吸收峰，未见蛋白质（280mn)与核酸（260nm)的特征吸收峰，红外光谱分析发现典型多糖吸收峰.关键词：南瓜；多糖;提取；纯化;纤维素酶收稿日期=2009-10-21基金项目：四

2、川省科技厅应用基础项目（04JY029—022)作者简介：陈玉玲（198—），女，四川巴中人，内江师范学院2006级学生•通讯作者：王碧（1964—），女，四川渠县人，内江师范学院教授，博士.0前言多糖（polysacharides简写为PS)又称多聚糖，是一种具有广泛生物活性的大分子，不仅是生物的营养成分，而且还参与多种生命活动.在过去相当长的时间里，大多将其作为一种实验废弃物，是资源的极大浪费.随着人们对传统中药的不断深入研究，从上世纪70年代开始，陆续有一批活性多糖成分被发现.近些年，随着生活水平的不断提高，人们的保健意识在逐渐增强，多糖作为保健食品的主要成分已悄然兴起[1]，有

3、学者说:21世纪的前20年是多糖的时代m.南瓜是葫芦科南瓜属中一年生蔓性草本植物，传统中医理论认为，中国南瓜性味甘温，入脾胃二经，具有补中益气，消炎止痛，解毒杀虫等功效[3].现代研究表明，南瓜有降低血脂、调节血糖等多种生理功能，南瓜产品的开发日益受到世界发达.国家的重视，已被视为特效保健食品，其开发前景十分诱人M.植物多糖提取法有多种，如溶剂提取法、酸提法、碱提法等•南瓜多糖（pumpkinpolysaccharide,PP)是植物多糖中的一种，已见报道的南瓜多糖的提取采用传统的热水浸提法较多，1999年孔庆胜等[5]曾用热水法提取南瓜多糖，并用纸层析法分析了南瓜多糖的成分，发现南瓜

4、多糖由D—葡萄糖、D—半乳糖、L一阿拉伯糖、木糖和D—葡糖醛酸组成.2002年张拥军等[6]曾用热水法提取，有机溶剂分步萃取，再用乙醇沉淀法沉淀提取南瓜多糖，但其提取率仅为2.6%.水法提取南瓜多糖操作简便，但由于水作为溶剂难以完全溶出其中的某些多糖物质，所以需要多次浸提，操作时间长，收率低.近年赵二劳等发现用超声波提取南瓜多糖可大大缩短提取时间，但其提取率不高[7].采用酶法提取，反应条件温和，是一种较为先进有效的提取方法[8].本工作在文献[9]的基础上，采用纤维素酶法从成熟老南瓜中提取水溶性粗多糖.通过单因素试验考察了纤维素酶浓度、提取时间、提取温度、pH值对南瓜多糖提取率的影响

5、，粗多糖经双氧水法脱色，再利用蛋白酶与Sevage法[1°]相结合脱蛋白，南瓜多糖的提取率为4.9%,多糖的纯度为52%.紫外光谱分析表明在217nm有多糖的特征吸收峰，但未见蛋白质（280nm)与核酸（260nm)的特征吸收峰，红外光谱分析发现典型多糖吸收峰D112].1实验部分1.1材料和仪器材料和试剂：成熟老南瓜（四川内江桂湖街农贸市场购买）；纤维素酶(上海伯奥生物科技有限公司）；葡萄糖、95%乙醇、正丁醇、三氯甲烷、丙酮、氢氧化钠、苯酚、浓硫酸、30%H202、柠檬酸、柠檬酸三钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、无水乙醚：AR(成都科龙化工试剂厂）.试液的配制：用柠檬酸和柠檬酸三钠水溶

6、液分别配制pH为3.2〜8.0的不同pH值缓冲溶液；配制100mg/L的葡萄糖标准溶液，用时定量稀释.配制5%苯酚溶液：取苯酚100g,加铝片0.lg和0.05gNaHCO3，蒸馏收集182C馏分，称取此馏分25g，加水475g,溶解后盛于棕色试剂瓶中，放人冰箱备用.Sevag试剂：氣仿-正丁醇=4:1仪器：DZF—6090真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；HZS—HA型水浴震荡器（哈尔滨东联六厂）；BCD—163K/T冷藏冷冻箱（青岛海尔股份有限公司）；TDL—5—A型低速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；722N可见分光光度计(上海科技精密仪器有限公司）；TJ270—30红外

7、分光光度计（天津市光学仪器厂）.1.2实验方法1.2.1南瓜多糖的提取与纯化[18]称取新鲜成熟老南瓜—切片、榨汁得南瓜溶液—纤维素酶促水解—酶灭活—离心浓缩—浓缩液乙醇沉淀—离心—分别用丙酮、无水乙醚、无水乙醇洗涤沉淀一真空干燥—南瓜粗多糖—蒸馏水溶解—H202脱色—Sevag法脱蛋白—乙醇沉析—离心—真空干燥—南瓜精多糖.o^L———-……」------J0.10.61.11.6mmt/%1.2.1.1南瓜粗多糖的提取准确称取100g南瓜切