dapt对耐雷帕霉素骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

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1、第44卷第6期第640页华中科技大学学报(医学版)Vo1．44No．6P．6402015年12月ActaMedUnivSciTechnolHuazhongDec．2O15DAPT．对耐雷帕霉素骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响*张聃，刘冲，王军，田强，张广平，詹新立△广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科，南宁530021摘要：目的通过研究分泌酶抑制剂(DAPT)对耐雷帕霉素(RAPA)骨肉瘤细胞株增殖、凋亡的影响，探讨mTOR通路与Notch通路在骨肉瘤细胞增殖、凋亡中的关系。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞株及建立耐雷帕霉素骨

2、肉瘤MG63细胞株；噻唑蓝(MTT)比色法测定不同剂量雷帕霉素及DAPT对各细胞株增殖的影响；流式细胞仪检测不同剂量药物对各细胞株凋亡的影响；Westernblot法检测各细胞株中p53的表达。结果MTT法检测显示雷帕霉素及DAPT均能抑制各细胞株的增殖。流式细胞术检测结果表明雷帕霉素及DAPT均能诱导各细胞株发生凋亡，MG63细胞早、晚期凋亡率均与药物作用剂量呈正比，耐雷帕霉素MG63细胞仅在高浓度药物作用下，早、晚期凋亡率与细胞正常凋亡率相比差异有统计学意义。Westernblot检测结果显示，不同浓度雷帕霉素、D

3、APT作用下，MG63细胞p53表达量随药物浓度升高而增加，而耐雷帕霉素MG63细胞p53表达量未随药物浓度升高而增加。结论雷帕霉素、DAPT对MG63细胞及耐雷帕霉素MG63细胞均能抑制增殖、促进凋亡。二者均可能是通过促进p53蛋白表达而发挥凋亡效应。凋亡过程中阻断mTOR后可能会降低骨肉瘤细胞对DAPT的敏感性，同时抑制Notch通路与p53的协同作用。关键词：雷帕霉素；7-分泌酶抑制剂；骨肉瘤；p53中图分类号：R738．1DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2015．06．005Effec

4、tofDAPTontheProliferationandApoptosisofRapamycin-resistantOsteosarcomaCellsZhangDan，LiuChong，WangJunetalDepartmentofSpineandOrthopedicSurgery，TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，ChinaAbstractObjectiveToexaminetheeffectsofthe7-secre

5、taseinhibitor(DAPT)ontheproliferationandapoptosisofrapa—mycin(RAPA)一resistantosteosareomacells，andprobeintotherelationshipbetweenthemT0RpathwayandtheNotchpathwayintheproliferationandapoptosisofosteosarcomacells．Methods0steosarcomacellsMG63wereculturedinvitroandR

6、APA-resistantcellswereestablished．Themethylthiazolyltetrazolium(MTT)assayandflowcytometrywereusedtodetecttheeffectsofdifferentconcentrati0nsofIAPAandDAPTontheproliferationandapoptosisofnormalandRAPA-resistantMG63cells．TheexpressionofP53proteinwasdetectedbvWester

7、nblotting．ResultsBothRAPAandDAPTcouldinhibittheprolif—erationandinducetheapoptosisofthetwocel1populationsinvitro．TheearlyandlateapoptosisratesofnormalMG63cellswereproportionallyincreasedwiththedosesofthetwodrugs．Thereweresignificantdifferencesintheearlyand1ateap

8、optosisratesbetweenRAPA-resistantMG63cellsandnormalMG63cellstreatedbyhighconcentrationsofdrugs．Westernblottingshowedthattheproteinexpressionofp53wassignificantlyincre