MG53上调正常和缺氧复氧损伤的新生大鼠心肌细胞瞬间外向K2b电流

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1、中文摘要第一章正常条件下过表达MG53对大鼠心肌细胞膜上瞬间外向钾通道(I。o)功能的调节本实验利用腺病毒载体技术，将带有MG53基因的重组腺病毒载体转染进乳鼠心肌细胞，使乳鼠心肌细胞过表达MG53，从而观察MG53对k功能的调控，并探讨正常生理条件下MG53对心肌细胞上Ito的功能和电生理机制的调节作用。结果表明：1．MG53对瞬间外向钾通道(Ito)功能的调节1．1．MG53对瞬间外向钾通道(Ito)电流密度和门控动力学的影响乳鼠心肌细胞转染两种腺病毒，分别为AdMG53和AdGFP(作为对照)，48h后膜片钳记录k电流。结果表明，较AdGFP组相比，

2、AdMG53组lto电流密度显著增加，增加了1．9倍(P=O．000<0．05)。即MG53能显著增加Ito电流密度，但对Ito通道的激活动力学无显著影响。AdMG53组在+60mV所产生电流达到峰值的时间(timetopeak，1]呼)较AdGFP组延长，但差异无统计学意义(P--0．168>0．05)。同时，MG53能显著减慢IIo通道的失活动力学，使Ito通道电流衰减的时间延长。AdMG53组电流峰值衰减一半的时间To．5较AdGFP组显著延长(P=0．015<0．05)，有统计学意义。硕士学位论文意义。2．MG53对瞬间外向钾通道(Ilo)蛋白表达

3、的影响I幻由0c亚基(主要为Kv4．2)和p亚基(主要为KChlP2)构成。本研究同时观察了过表达MG53对乳鼠心肌细胞以下2组蛋白表达量的影响：KChlP2和Kv4．2。结果表明，MG53能使乳鼠心肌细胞上的I幻的B亚基KChlP2蛋白的表达量显著增加，增加了3．4倍，有统计学意义(P=0．015<0．05)。但对k的仪亚基Kv4．2蛋白的表达量无显著影响，差异无统计学意义(P=0．434>0．05)。结果表明，MG53上调Ito的一个重要机制是增加其D亚基KChlP2的表达量。结论：1．MG53能够增加瞬间外向钾通道(I幻)电流密度，减慢通道的失活动力

4、学，但对I幻的激活动力学，以及电压依赖性激活无显著影响。MG53同时能够使Ito的电压依赖性失活曲线发生显著正向移位，但不改变Ito的离子选择性。2．MG53显著增加KChlP2的表达量，但对Kv4．2蛋白的表达量无显著影响，提示MG53上调Ilo的一个重要机制是增加LD的D亚基的表达。第二章缺氧复氧(H爪)损伤对新生大鼠心肌细胞膜上瞬间外向钾通道(I。o)功能的影响大量研究报道发现缺血，缺氧可以使心肌细胞膜上的瞬间外向钾通道(Ito)受到抑制，本实验通过模拟临床的缺血再灌注损伤，在乳鼠心肌细胞上建立有效的缺氧复氧模型，根据相关文献报道以及预实验结果，建立

5、缺氧4h复氧4h的缺氧复氧(H／R)模型，通过记录k电流，来检测模型是否成功，并进一步从分子水平来探索k各亚基的表达水平变化。1．缺氧复氧(H瓜)对瞬间外向钾通道(k)功能的调节1．1．缺氧复氧(H／R)对瞬间外向钾通道(I幻)电流密度和门控动力学的影响乳鼠心肌细胞于37。C，5％C02培养24h后将培养基更换为缺氧液，放置低氧培养箱(37。C，1％02，25％C02)培养4h，再更换为复氧液，放置于37。C，5％C02培养4h后膜片钳记录I幻电流。结果显示，缺氧复氧(H4／R4)组Ito电流密度低111中文摘要于正常(Normal)组，但差异无显著性。H

6、4／R4组的TTP较正常组比时间延长约3．1lms，但差异无统计学意义(P=0．185>O．05)。同时，H4／R4组To．5较正常组比时间延长约19．28ms，但差异无显著性(P=o．256>0．05)。而两组细胞大小的差异有显著性，H4／R4能使乳鼠心肌细胞电容(capacitance)显著增加(P_O．ooo)。1．2．缺氧复氧(H瓜)对瞬间外向钾通道(It0)电压依赖性激活的影响H4／R4组电流密度在+20^斗90mV的电压范围内均显著低于Normal组，P<0．05。为观察H／R对I协通道电压依赖性激活动力学特征的影响，将I．V曲线的结果转换成膜

7、电导，对条件刺激电压作图，然后采用Boltzmann方程g／gmax=1／{l+exp(Vo．5-V)／l【)进行拟合，式中得到Ito激活曲线，然后求得Vo．5，绷(半数激活电压)和k(斜率因子)。H4／lⅥ组与Normal组的V0．5。act无显著差异(P=O．938>0．05)，同时k值两组之间也无统计学意义，说明H／R不改变的I协通道的离子选择，H／R对Ito电压激活曲线无明显影响。1．3．缺氧复氧(H瓜)对瞬间外向钾通道(I协)电压依赖性失活的影响H／R使Ito通道的电压依赖失活曲线略负向移位，但无统计学意义。H4／R4组和Normal组的半数失活

8、电压Vo．5,met值分别为．29．15士3．28mV(n_7)，