利多卡因对缺氧-复氧培养大鼠心肌细胞c

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1、利多卡因对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞c【摘要】目的：研究利多卡因对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞LDH漏出及c-fos表达的影响。方法：建立SD大鼠心肌细胞原代培养及缺氧/复氧模型。将40孔原代培养大鼠心肌细胞分为5组，每组8孔。Ⅰ组为对照组；Ⅱ组缺氧2h复氧3h；Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组与Ⅱ组比在缺氧前开始分别加入利多卡因50μmol·L-1、100μmol·L-1和150μmol·L-1。复氧3h时用生化比色法测定培养基中乳酸脱氢酶（LDH）活力。将75孔细胞同上分为5组，在复氧2h时用免疫组化法和图像平均灰度分析法测定c-fo

2、s的表达。结果：3种浓度利多卡因均能减少心肌细胞LDH漏出（P<0.05）。Ⅱ组与Ⅰ组比c-fos表达明显增加，Ⅵ组和Ⅴ组与Ⅱ组比较c-fos表达明显被抑制，平均灰度值差异有统计学意义（P<0.05）。结论：3种浓度的利多卡因能防治心肌细胞缺氧/复氧损伤，并且呈剂量相关性。【关键词】心肌细胞；缺氧/复氧；c-fos；利多卡因[Abstract]Objective:Toobservetheeffectoflidocaineonc-fosexpressioninculturedcardiacmyocyteso

3、fneonatalratsandtheconcentrationoflactatedehydrogenase(LDH)inculturemediumduringreoxygenation.Methods:OriginalculturedcardiomyocytesofSDratandhypoxia-reoxygenationinjuriedimmaturecariomyocyteyocytesol·L-1,100μmol·L-1and150μmol·L-1)sincehypoxiarespectively.Immun

4、ohistochemistryandmeangrayatetheeffectoflidocaineonexpressionofc-fosinculturedratcardiomyocyteofeachgroup2hoursafterreoxygenation.Releaseoflactatedehydrogenaseofthecardiomyocytesofeachgroupinedasinjuryindexofcardiomyocytes.Results:Releaseoflactatedehydrogenasey

5、ocytesol·L-1and150μmol·L-1(P<0.05).Conclusion:Hypoxia-reoxygenationinjuryofthecardiomyocyteyocyte;Hypoxia-reoxygenation;c-fos;Lidocaine心肌缺血/再灌注损伤是一临床常见的病理现象。其机制及有效防治措施的研究在不断深入。抗心律失常药利多卡因（lidocaine）有抗氧化等作用，可减轻心肌缺血再灌注损伤。本实验观察利多卡因对缺氧/复氧培养大鼠心肌细胞应激蛋白c-fos表达及乳酸脱氢酶

6、（LDH）释放的影响。1材料和方法1．1试剂Fos单克隆抗体为SantaCruz公司产品，ABC试剂盒和DAB购自上海华美公司。DMEM培养基为Gibico公司的产品。1．2大鼠心肌细胞培养参照EM培养基稀释成适当浓度细胞悬液，按一定密度接种于明胶铺底的24孔细胞培养板。每24h更换培养基1次。将生长良好，同步搏动明显的原代培养心肌细胞用于实验。1．3缺氧/复氧心肌细胞模型的建立在用于实验的细胞中换入无血清DMEM培养基，放入37℃，5%CO2培养箱中孵育12h。然后快速换入经95%N2-5%CO2充分平衡的低糖无血

7、清DMEM培养基，并将培养板迅速放入95%N2-5%CO2气体平衡的缺氧装置内，Detex-Ommeda气体检测仪测得装置排气口氧浓度<1%。细胞缺氧2h后迅速换入高糖DMEM培养基，并放入37℃CO2培养箱中复氧。1．4实验分组将40孔同步搏动良好，密度无明显差别的原代培养心肌细胞随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组，在实验前均换成无血清培养基孵育5h。Ⅰ组不缺氧，余四组缺氧2h、复氧3h。其中，Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组从缺氧开始分别加入利多卡因50μmol·L-1、100μmol·L-1、150μmol·L-1，Ⅱ组未用利多卡

8、因处理。Ⅰ组同步更换无血清高糖培养基。在复氧3h时用生化比色法测定每孔培养基中LDH含量。将另外75孔细胞也随机均分5组，每组与以上的40孔细胞处理相同。在复氧2h时，用免疫组化法测定心肌细胞c-fos表达。1．5fos-ABC免疫组化法及常规染色法培养细胞复氧2h后用4%多聚甲醛固定5min（室温）；0.3%TritonX-100破膜5min